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菌種的培養(yǎng)：

1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。

4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長時間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。

5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。

6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 [3] 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

N-Fmoc-N-甲基-O-叔丁基-L- 98%p, p’-DDE標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,u=3%,溶劑:石油Anti-YAP1/FITC  熒光素標(biāo)記原癌基因Yes相關(guān)蛋白1抗體IgG

Fmoc-N-甲基-L-纈 98%p, p’-DDE標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=3%,溶劑:石油Anti-VEGFR1/VEGF-R1/Flt-1 /FITC  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長因子受體1抗體IgG

Fmoc-N-甲基-D-纈 98%p, p’-DDT標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,u=3%,溶劑:石油Anti-VEGFR2(VEGF-R2)Flk1/FITC  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體IgG

Fmoc-L-氨 98%p, p’-DDT標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=4%,溶劑:石油Anti-SV2A/FITC  熒光素標(biāo)記突觸泡蛋白2A抗體IgG

FMOC-甘氨 99%p, p’-DDD標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:石油Anti-sVEGFR2/sFLK-1/FITC  熒光素標(biāo)記可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體（人）IgG

(s)-N-FMOC基苯氨  98.5%p, p’-DDD標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=7%,溶劑:石油Anti-p-VEGFR2/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體IgG

2-(N-Fmoc)--1,3-丁二  98.5%o，p’-DDT標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=2%Anti-FLT-3/CD135/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠FMS樣激3IgG

Fmoc-纈氨 98.5%o，p’-DDT標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=4%Anti-Phospho-FLT3 (Tyr591) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化FMS樣激3IgG

阿氏腸桿菌三化釕 水合物 38.0-42.0% Ru basisAnti-FLG/FITC  熒光素標(biāo)記絲聚蛋白/中間絲蛋白抗體IgG大鼠組蛋白脫乙酰1(HDAC1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

氧化銀 AR,99.7%  Anti-FLIP S/L /FITC  熒光素標(biāo)記凋亡調(diào)節(jié)因之一抗體IgG大鼠促狀腺素(TSH)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

氧化銀 CP,99.0% Anti-FLIPS/FITC  熒光素標(biāo)記凋亡調(diào)節(jié)因之一抗體（短型）IgG大鼠III型膠原α1(COL3α1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

化銀 AR,99.5%Anti-FN /FITC  熒光素標(biāo)記纖維連結(jié)蛋白抗體IgG大鼠促狀腺胚胎因子(TEF)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

硝銀 AR,99.8%Anti-FN/RBITC  紅色熒光素標(biāo)記纖維連接蛋白抗體IgG大鼠促狀腺素釋放激素(TRH)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

硝銀 99.99% metals basisAnti-FOS B/FITC  熒光素標(biāo)記FosB抗體IgG大鼠狀腺素抗體(TAb)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

硝銀  ACS, ≥99.0%Anti-FOSL1/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗FOSL1抗體IgG大鼠狀腺素(T4)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

硝銀標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.1017mol/LAnti-FOSL2/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗FOSL2抗體IgG大鼠緊密連接蛋白1(TJP1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

硝銀標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.1000mol/L(0.1N)Anti-FOXJ1/HFH-4/FITC  熒光素標(biāo)記抗插頭蛋白J1抗體IgG大鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

硝銀標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.01000mol/L(0.01N)Anti-FOXO1/FOXO1A/FITC  熒光素標(biāo)記叉頭轉(zhuǎn)錄因子O1抗體IgG大鼠組織因子(TF)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

氧化銀 99.99% metals basisAnti-Phospho-FoxO1 (Thr24)/FoxO3a (Thr32) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠叉頭蛋白家族抗體IgG大鼠質(zhì)金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

二四氨鈀 Pd ≥43.0%Anti-Phospho-FoxO1 (Ser319) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠叉頭蛋白家族1抗體IgG大鼠質(zhì)金屬蛋白抑制因子3(TIMP-3)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

硝 99.5%（劇品）Anti-Phospho-FoxO1 (Ser256) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠叉頭蛋白家族1抗體IgG大鼠質(zhì)金屬蛋白抑制因子4(TIMP-4)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

硝 99.999%（劇品）Anti-FOXO3A/FITC  熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)錄因子FOXO3A抗體IgG大鼠組織多肽抗原(TPA)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

硝 98%（劇品）Anti-Phospho-FoxO3a (Ser318/321) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠叉頭蛋白3A抗體IgG大鼠(SERP1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng)，有時母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

⑵ 種子罐種子制備　

種子罐種子制備的工藝過程，因菌種不同而異，一般可分為一級種子、二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為一級種子，把一級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為二級發(fā)酵。如果將一級種子接入體積較大的種子罐內(nèi)，經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級種子，將二級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為三級發(fā)酵。同樣道理，使用三級種子的發(fā)酵，稱為四級發(fā)酵。