微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

⑵ 種子罐種子制備　

種子罐種子制備的工藝過程，因菌種不同而異，一般可分為一級(jí)種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為一級(jí)種子，把一級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為二級(jí)發(fā)酵。如果將一級(jí)種子接入體積較大的種子罐內(nèi)，經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級(jí)種子，將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理，使用三級(jí)種子的發(fā)酵，稱為四級(jí)發(fā)酵。

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菌種的培養(yǎng)：

1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級(jí)種）、原種（二級(jí)種）和栽培種（三級(jí)種）三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。

4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對(duì)于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。

5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。

6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營(yíng)養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長(zhǎng)溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 [3] 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長(zhǎng)，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

GR，≥99.8%As,Cd,Cr（六價(jià)）：100μg/ml；Pb,Hg：200μg/ml；Anti-APEX1/Ref-1 /FITC  熒光素標(biāo)記氧化還原因子1抗體IgG

 PT200μg/ml～2000μg/mlcx

 SP(Na,Mg,K,Ca,NH4+)多元素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液400μg/ml：Na；500μg/mlAnti-API5/AAC11 /FITC  熒光素標(biāo)記凋亡抑制因子5抗體IgG

 99.99% metals basis(As,Bi,Cd,Cu,Cr,Fe,Hg,Mn,Ni,Se,Pb,Zn）多元素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液 100Anti-APNG/MPG/FITC  熒光素標(biāo)記N-甲基嘌呤DNA糖基化IgG

ACS, 99.5%(Al,Bi,Fe,Mn,Mo,Sb,Si,Ta,Ti,Zn,Zr)多元素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/Anti-apoA1/FITC  熒光素標(biāo)記載脂蛋白A1抗體IgG

 99.999% metals basis100μg/mlAnti-ApoB/FITC  熒光素標(biāo)記載脂蛋白B抗體IgG

 99.9999% metals basis100μg/mlAnti-apo-D /FITC  熒光素標(biāo)記載脂蛋白D抗體IgG

偏酸鈉,四水 ARBi,Se,Sn,Te,50μg/ml;As,P,Sb,100μg/ml;Fe,Ni,Pb,S,Zn,200μg/Anti-Apo-E/FITC  熒光素標(biāo)記載脂蛋白E抗體IgG

黃直絲鏈霉菌一氧化錳 99.99%兔子免疫球蛋白G(IgG)免疫試劑盒色素c氧化1抗體RAP1A  抗Rap1A抗體

中型貨架 1800外*700*2000 三層鋼板 300KG/層兔子免疫球蛋白E(IgE)免疫試劑盒表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白4抗體RANK/CD265  核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB受體抗體(核因子kB受體活化因子)

重型貨架 2000內(nèi)*600*2000 二層鋼板 承載1000KG/層兔子免疫球蛋白A(IgA)免疫試劑盒表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白6抗體RanGAP1  RAN GTPase激活蛋白1抗體

中型貨架 2000*600*2000mm 四層兔子硫氧化還原蛋白(Trx)免疫試劑盒表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白8抗體RanBP7/Importin 7  RAN結(jié)合蛋白7抗體

中型貨架 2000*600*2000 六層兔子硫軟骨素(CS)免疫試劑盒硫軟骨素抗體RanBP3  RAN結(jié)合蛋白3抗體

鈷鋰 99.8% metals basis兔子硫類肝素(HS)免疫試劑盒上皮類癌相關(guān)抗原抗體RanBP2  RAN結(jié)合蛋白2/核孔蛋白抗體

聚乙烯1788型 解度：87.0～89.0%(mol/mol)兔子硫角質(zhì)素(KS)免疫試劑盒化蛋白激PKC/CPI-17抗體RanBP1  RAN結(jié)合蛋白1抗體

聚乙烯1797型 解度：96.0～98.0%(mol/mol)兔子可溶性粘附分子(Sam)免疫試劑盒著絲粒蛋白KRan/ARA24  雄激素受體相關(guān)蛋白24抗體

聚乙烯1799型 解度：99.8～100%(mol/mol)兔子可溶性血管粘附分子1(sVCAM-1)免疫試劑盒腫瘤/抗原1BRAMP1  受體活性修飾蛋白1抗體

聚乙烯1795型 解度：94.0～96.0%(mol/mol)兔子可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體(sEPCR)免疫試劑盒轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體RAMP/CDT2  維調(diào)節(jié)核質(zhì)相關(guān)蛋白

聚乙烯1788低粘度型 解度：87.0～89.0(mol/mol)，CPS：4.6-5兔子可溶性P選擇素(sP-selectin)免疫試劑盒8號(hào)染色體開放閱讀框K29抗體RALDH2  視黃脫氫2型抗體

聚乙烯 28-99 Mw ~145,000兔子可溶性E選擇素(sE-selectin)免疫試劑盒色素P450 3A4抗體RALB  Ras樣蛋白B抗體

聚乙烯 3-96 96.8-97.6 mol% hydrolysis兔子可溶性CD40配體(sCD40L)免疫試劑盒色素CYP2D1抗體RALA+RALB  Ras樣蛋白A+B抗體

聚乙烯 40-88 Mw ~205,000兔子抗中性粒顆粒抗體(ANGA)免疫試劑盒CD33抗體RALA  Ras樣蛋白A抗體

聚乙烯 56-98 Mw ~195,000兔子抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ Ab)免疫試劑盒視網(wǎng)膜母瘤結(jié)合蛋白8抗體RAIDD  P2凋亡相關(guān)蛋白抗體