微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過(guò)0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

⑵ 種子罐種子制備　

種子罐種子制備的工藝過(guò)程，因菌種不同而異，一般可分為一級(jí)種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為一級(jí)種子，把一級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為二級(jí)發(fā)酵。如果將一級(jí)種子接入體積較大的種子罐內(nèi)，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級(jí)種子，將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理，使用三級(jí)種子的發(fā)酵，稱為四級(jí)發(fā)酵。

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菌種的培養(yǎng)：

1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級(jí)種）、原種（二級(jí)種）和栽培種（三級(jí)種）三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過(guò)擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過(guò)程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。

4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無(wú)菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對(duì)于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。

5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。

6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無(wú)機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無(wú)雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過(guò)高，營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長(zhǎng)溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 [3] 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長(zhǎng)，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過(guò)多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來(lái)吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

3-氯芐溴 97%人參皂苷Rf 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%Cygb (cytoglobin)  球蛋白抗原

2-氯噻吩 96%甘草酸銨鹽 97%PAR-2 OP(Protease-activated receptors-2 Activating Orange-peptide)  蛋白激活受體-2桔抗肽

5-氯噻吩-2-磺酰 97%甘草次酸(β型） 97%DLX4 (Dsital-less homebox4 isoformAlpha/ Beta)  末梢同源匡基因多肽片段

5-氯噻吩-2-磺酰氯 96%甘草酸  93%ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)  ?？窠?jīng)素（35肽）

2,2'-二硫二吡 98%染料木苷 from Glycine max (soybean), ≥95% (HPLC)ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Ala22)  ?？窠?jīng)素（35肽）

二芐基硫 99%人參皂苷Rb3 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Arg22)  ?？窠?jīng)素（35肽）

2,5-二溴 98%葡萄糖 CPShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Dap22)  ?？窠?jīng)素（35肽）

2,5-二溴噻吩 96%牡荊素葡萄糖苷  98%ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Gln9)  ?？窠?jīng)素（35肽）

過(guò)渡原囊菌L-蘋果 98%人(SS)免疫試劑盒1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框194抗體PHYH  植烷氧化抗體

L-蘋果 CP人生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)免疫試劑盒1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框198抗體phospho-β catenin(Tyr142)  化β 連環(huán)素蛋白抗體

順二 AR,99.5%人生長(zhǎng)激素釋放多肽(GHRP)免疫試劑盒1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框21抗體Phospho-Zyxin (Ser142/Ser143)  化斑聯(lián)蛋白抗體

順二 CP,99%人生長(zhǎng)激素結(jié)合蛋白(P)免疫試劑盒1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框216抗體Phospho-Zap-70(Tyr493)  化zeta相關(guān)蛋白70抗體

順二 藥用級(jí)，EP,USP人生長(zhǎng)激素(GH)免疫試劑盒1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框43抗體Phospho-Zap-70 (Tyr315/Tyr319)  化zeta相關(guān)蛋白70抗體

D-蘋果 99%人生長(zhǎng)分化因子-9(GDF-9)免疫試劑盒1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框50抗體phospho-YWHAE(Thr232)  化14-3-3E蛋白抗體

單硬脂甘油酯 >60.0%(GC)人生長(zhǎng)分化因子3(GDF3/UNQ222/PRO248)免疫試劑盒1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框49抗體phospho-YES1(Tyr537)  化原癌因酪氨蛋白激Yes1抗體

單硬脂甘油酯 99%(GC)人生長(zhǎng)分化因子2(GDF2)免疫試劑盒1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框53抗體phospho-YES1(Tyr426)  化原癌因酪氨蛋白激Yes1抗體

L-半胱氨 ≥98%,非動(dòng)物源，用于培養(yǎng)人生長(zhǎng)分化因子15(GDF15)免疫試劑盒1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框54抗體Phospho-YB1(Ser102)  化DNA結(jié)合蛋白B抗體

安息香 99.5%人生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌因α/黑素瘤生激因子(GROα/CXCL1/MGSA)免疫試劑盒1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框55抗體Phospho-YAP1(Tyr407)  化原癌因Yes相關(guān)蛋白1抗體

聯(lián)酰 99.0%人腎小球組織糖化終末產(chǎn)物(GTE-AGE)免疫試劑盒1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框56抗體Phospho-YAP1(Ser127)  化原癌因Yes相關(guān)蛋白1抗體

安息香二 99%人腎損傷分子1(Kim-1)免疫試劑盒1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框65抗體Phospho-WNK1(Thr60)  化賴氨缺陷型蛋白激1抗體

1-羥環(huán)己酮 98%人腎素前體免疫試劑盒1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框64抗體Phospho-Wee1(Ser642)  化WEE1蛋白抗體

2-羥-2-酮 97%人腎素(Renin)免疫試劑盒1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框69抗體Phospho-Wee1(Ser53)  化WEE1蛋白抗體

乙(95%) AR,95.0%人髓質(zhì)素前體(Pro-ADM)免疫試劑盒1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框77抗體Phospho-Wee1(Ser123)  化WEE1蛋白抗體