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測定意義

纖維素酶是由微生物產(chǎn)生的多組分的酶系，能水解纖維素β-1,4葡萄糖苷鍵生成葡萄糖，濾紙酶是其中的一個組分，研究濾紙酶活力對纖維素酶的研究具有非常重要的意義。

測定原理

濾紙酶水解濾紙產(chǎn)生的還原糖能與3,5-二硝基水楊酸生成紅棕色氨基化合物，在540nm處有最大光吸收，在一定范圍內(nèi)反應液顏色深淺與還原糖的量成正比，可測定計算得濾紙酶的活力。

自備實驗用品及儀器

天平、研缽、低溫離心機、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。

實驗方法學：

選擇抗凝的注意點：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

氯離子通道蛋白2抗體Human PDX1(Pancreas/duodenum homeobox protein 1) ELISA Kit木犀草苷 Cynaroside

C型凝集素結構域家族9成員A抗體Human C19orf10(UPF0556 protein C19orf10) ELISA Kit去甲基鹽酸

C型凝集素結構域家族9成員A抗體Human UBE3A(Ubiquitin-protein ligase E3A) ELISA Kit二甲酚橙四鈉

腦鈣粘蛋白12抗體Human ENTPD1(Ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 1) ELISA Kit苯甲酸

鈣粘蛋白20抗體Human MAPK8(Mitogen-activated protein kinase 8) ELISA Kit二十七烷

鈣粘蛋白29抗體Human CHIA(Acidic mammalian chitinase) ELISA Kit人黑色素（MSH）ELISA試劑盒,MSH ELISA kit

CD200受體抗體Human AVPR1B(Vasopressin V1b receptor) ELISA Kit人抗網(wǎng)硬蛋白抗體（ARA）ELISA試劑盒, ARA ELISA kit

鈣粘蛋白26抗體Human LILRB2(Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2) ELISA Kit人抗天然脫氧核糖核酸抗體（n-DNA-Ab）ELISA試劑盒,n-DNA-Ab ELISA

濾紙酶可見分光光度法檢測試劑盒犬脂蛋白脂(LPL)免疫試劑盒進口、組裝

牛乙酰輔A(acetyl-CoA)免疫試劑盒*直銷

α-黑色素細胞刺激素(α-MSH)免疫試劑盒*直銷

雞γ干擾素(IFN-γ)免疫試劑盒進口、組裝

Q熱科克斯體1(Q fever)抗體(IgA)免疫試劑盒進口、組裝

鼻病毒(RV)抗體(IgA)免疫試劑盒*直銷

牛白三烯B4(LT-B4)免疫試劑盒進口、組裝

魚雄烯二酮(ASD)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

小鼠前白蛋白(PA)免疫試劑盒*直銷

小鼠CXC趨化因子配體1(CXCL1)免疫試劑盒*直銷

操作步驟:

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內(nèi)配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。