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大鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)elisa試劑盒
具有如下優(yōu)點(diǎn):
一、高效、靈敏、特異的抗體;
二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型;
五、性價(jià)比非常好,節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。
產(chǎn)品名稱:大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)elisa試劑盒
英文名稱:Rat DPPⅣ ELISA Kit
規(guī)格:48T/96T
保存: 2-8℃(頻繁使用時(shí));-20℃(長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí))。
有效期: 6 個(gè)月(4℃);12 個(gè)月(-20℃)。
用途: 用于體外定量分析人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)胞裂解液
選擇ELISA試劑盒應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、安全性及經(jīng)濟(jì)性全面評(píng)價(jià)。
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操作流程如下:
(1)僅用于科研待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
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注意事項(xiàng):
1加樣:
①實(shí)驗(yàn)樣本過多時(shí),可分批次操作,以減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng)造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗(yàn)時(shí),使用加樣器加注試劑,并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性,此外,要做到一份樣本一個(gè)移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間的條件;
②用1個(gè)小溫度計(jì)放置在板孔反應(yīng)液中測(cè)量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會(huì)造成“邊緣效應(yīng)”,因此盡量采用水??;
3.洗板:
①手工洗板時(shí),拍板時(shí)要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫離;
②洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時(shí)可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實(shí)驗(yàn)室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法,在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次,或適當(dāng)增加洗板的次數(shù);
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成,定性測(cè)定用肉眼判讀試驗(yàn)結(jié)果時(shí),反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm;定量測(cè)定時(shí)用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果,酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽光或強(qiáng)光照射下,需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測(cè)試。
試劑配制:
1、酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。
2、標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。
3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
腎足蛋白(NPHN)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 變異鹽單胞菌 10g
肌鈣蛋白T((酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 尖孢鐮孢 250g
α-胞襯蛋白(SPTAN1)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 黑木耳 50g
谷氨酸脫氫酶(GDH)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 禾生殼二胞 100g
谷氨酸脫氫酶(GDH)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 葡枝根霉 25g
谷氨酸脫氫酶(GDH)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% 托姆青霉 1g
谷胱甘肽過氧化酶1(GPX1)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% 靈芝(赤芝,紅靈芝) 25g
谷胱甘肽過氧化酶1(GPX1)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% 茶莖點(diǎn)霉 5g
谷胱甘肽過氧化酶1(GPX1)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 孟氏假單胞菌 25g
乳過氧化物酶(LPO)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 泡盛曲霉 5g
乳過氧化物酶(LPO)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 葡萄園有孢漢遜酵母 1g
彈性蛋白(ELN)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 96% 藍(lán)微褐鏈霉菌 1g
血管生成素1(ANGPT1)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 96% 硬結(jié)節(jié)桿菌 5g
血管生成素1(ANGPT1)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 澤普林假絲酵母 1g
胃泌素(GT)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 施氏假單胞菌 25g
腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 溶桿菌 5g
腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥97% 貝萊斯芽胞桿菌 100g
腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥97% 鞘氨醇盒菌屬 25g
大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)elisa試劑盒高效CHIP DNA分子克隆 TXB2(Thromboxane B2) 100 ul
高效CHIP DNA分子庫構(gòu)建 KYN(Kynurenine) 100 ul
10倍PCR*緩沖液 FPGS(Folylpolyglutamate synthase) 100 ul
一步法PCR反應(yīng)液 TXB2(Thromboxane B2) 100 ul
超白金TAG DNA聚合酶 OT(Oxytocin) 20 ul
三磷酸脫氧核糖核苷酸(dNTPs)混合液 KYN(Kynurenine) 100 ul
一步法平端PCR反應(yīng)液 RFC1(Reduced Folate Carrier 1) 100 ul
一步法熒光定量PCR反應(yīng)液 Acetylated p53(Acetylated p53) 100 ul
基因甲基化特異性PCR擴(kuò)增(MSP) Cleaved P9(Cleaved Caspase-9) 100 ul
大量總RNA氯化銫純化 Cleaved P8(Cleaved Caspase-8) 100 ul
全血總RNA純化 Rbx2(RNF7) 100 ul
組織總RNA純化 FBLN3(Fibulin-3) 100 ul
細(xì)胞總RNA純化 Anti-tissue transglutaminase IgG(Anti-tissue transglutaminase IgG) 20 ul
植物總RNA純化(低多糖/酚) Ig(Immunoglobulin) 100 ul
植物總RNA純化(高多糖/酚) Cleaved BID/TBID(Cleaved BH3-interacting domain death agonist) 100 ul
植物mRNA直接純化 GABPA(GA-binding protein alpha chain) 100 ul
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