實(shí)驗(yàn)操作步驟：  

a．采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動(dòng)物。

b．立即在無菌超凈臺(tái)內(nèi)用70％乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品介紹：

名稱    小鼠腎小球上皮細(xì)胞

2.組織來源：腎組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

小鼠腎小球上皮細(xì)胞分離自腎組織；腎臟是機(jī)體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時(shí)經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡。腎臟同時(shí)還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細(xì)胞生成素、活性3、前列腺素、激肽等，又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場(chǎng)所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進(jìn)行。腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團(tuán)毛細(xì)血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動(dòng)脈進(jìn)入腎小球。腎小球上皮細(xì)胞是由間充質(zhì)細(xì)胞分化發(fā)育、襯貼于腎小球血管腔的單層扁平上皮細(xì)胞，是腎小球的固有細(xì)胞之一，也是構(gòu)成腎小球?yàn)V過膜的重要組成部分。腎小球上皮細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)和功能是腎單位濾過及腎小球微環(huán)境穩(wěn)定的重要保障。腎小球?yàn)V過膜的最外層為上皮細(xì)胞層，厚約40nm，腎小球上皮細(xì)胞是腎小囊的臟層上皮細(xì)胞，貼附于腎小球血管外側(cè)基底膜上。上皮細(xì)胞又稱足細(xì)胞，足細(xì)胞的不規(guī)則突起為足突，其間有許多狹小間隙，血液經(jīng)濾過膜過濾入腎小球囊。腎小球上皮細(xì)胞可通過合成和分泌腎上腺髓質(zhì)肽抑制系膜細(xì)胞增殖，腎上腺髓質(zhì)肽作為一種重要的旁分泌因子，可保持腎小球微環(huán)境穩(wěn)定，并參與腎小球的炎癥過程。體外培養(yǎng)的腎小球上皮細(xì)胞對(duì)各型腎小球腎炎具有重要的研究價(jià)值。

5.方法簡介：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腎小球上皮細(xì)胞采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腎小球上皮細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號(hào)CM-M209

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣

傳代特性可傳1-2代

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

處理方法：

收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。并進(jìn)行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時(shí)后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3. 預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細(xì)胞密度較小，無菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上，進(jìn)行傳代。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得最佳實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

1 管 JM109大腸桿菌 JM109 E.coli Strain -80℃保存

2 ug pRLuc-N2 pRLuc-N2 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

100mL 病毒沉淀劑 Virus Precipitation Reagent 4℃保存

2 ug pcDNA3.1/V6-His B pcDNA3.1/V6-His B 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

0.1%呂氏堿性美藍(lán)染色液  5ml*6支/盒

1g 次甲基綠 Methyl Green B 常溫干燥保存

50T 牛副流感病毒PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-2?嵌?L?

小鼠腎小球上皮細(xì)胞志賀氏菌增菌肉湯 英文名稱：Shigiella Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

志賀氏菌顯色培養(yǎng)基 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：1000ml 小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化2(ACE2)免疫試劑盒*直銷

柯氏尿素瓊脂 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化(ACE)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

MLCB寒天培地 英文名稱：MLCB Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠血管緊張素原(aGT)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

GN增菌液（10ml） 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：10ml*20 小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

H-頂層培養(yǎng)基 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)免疫試劑盒*直銷

營養(yǎng)V-B培養(yǎng)基（底層） 英文名稱：minimum Nutritional V-B Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠血管緊張素1-7(Ang1-7)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

粘液酸鹽測(cè)試肉湯 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：1ml*20支 小鼠血管活性腸肽(VIP)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

粘液酸鹽質(zhì)控肉湯 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：1ml*20支 小鼠雄烯二酮(ASD)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

煌綠肉湯增菌液基礎(chǔ) 英文名稱：Brilliant Green Enrichment Broth Base 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠雄激素受體(AR)免疫試劑盒*直銷