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MIS/AMH elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)
具有如下優(yōu)點(diǎn):
一、高效、靈敏、特異的抗體;
二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型;
五、性價(jià)比非常好,節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。
產(chǎn)品名稱:TGF-β1 elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)
英文名稱:TGF-β1 elisa Kit
規(guī)格:48T/96T
保存: 2-8℃(頻繁使用時(shí));-20℃(長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí))。
有效期: 6 個(gè)月(4℃);12 個(gè)月(-20℃)。
用途: 用于體外定量分析人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)胞裂解液
選擇ELISA試劑盒應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、安全性及經(jīng)濟(jì)性全面評(píng)價(jià)。
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操作流程如下:
(1)僅用于科研待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過(guò)夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
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注意事項(xiàng):
1加樣:
①實(shí)驗(yàn)樣本過(guò)多時(shí),可分批次操作,以減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng)造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗(yàn)時(shí),使用加樣器加注試劑,并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性,此外,要做到一份樣本一個(gè)移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間的條件;
②用1個(gè)小溫度計(jì)放置在板孔反應(yīng)液中測(cè)量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會(huì)造成“邊緣效應(yīng)”,因此盡量采用水?。?/span>
3.洗板:
①手工洗板時(shí),拍板時(shí)要垂直,避免交叉污染,用力不能過(guò)猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫離;
②洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時(shí)可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實(shí)驗(yàn)室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法,在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次,或適當(dāng)增加洗板的次數(shù);
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成,定性測(cè)定用肉眼判讀試驗(yàn)結(jié)果時(shí),反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm;定量測(cè)定時(shí)用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果,酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽(yáng)光或強(qiáng)光照射下,需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測(cè)試。
試劑配制:
1、酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。
2、標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。
3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
細(xì)胞PKCβ2激酶活性定量(A/B/C) CRIP1 (Cysteine-rich protein 1) 100 ul
組織PKCβ2激酶活性定量(A/B/C) CUEDC1 (CUE domain-containing protein 1) 20 ul
細(xì)胞PKCγ激酶活性定量(A/B/C) CRISPLD1 (Cysteine-rich secretory protein LCCL domain-containing 1) 100 ul
組織PKCγ激酶活性定量(A/B/C) CPXCR1 (CPX chromosomal region candidate gene 1 protein) 100 ul
細(xì)胞PKCδ激酶活性定量(A/B/C) CDRT4 (CMT1A duplicated region transcript 4 protein homolog) 100 ul
組織PKCδ激酶活性定量(A/B/C) CFDP1 (Craniofacial development protein 1) 100 ul
細(xì)胞PKCε激酶活性定量(A/B/C) CRAMP1 (Protein cramped-like) 100 ul
組織PKCε激酶活性定量(A/B/C) CEP85 (Centrosomal protein of 85 kDa) 100 ul
細(xì)胞PKCζ激酶活性定量(A/B/C) FOXC2(Forkhead box protein C2) 100 ul
組織PKCζ激酶活性定量(A/B/C) CCDC88A (Girdin) 20 ul
細(xì)胞PKCη激酶活性定量(A/B/C) COL13A1 (Collagen alpha-1(XIII) chain) 100 ul
組織PKCη激酶活性定量(A/B/C) CRAMP1 (Protein cramped-like) 20 ul
細(xì)胞PKCθ激酶活性定量(A/B/C) FOXC2(Forkhead box protein C2) 100 ul
組織PKCθ激酶活性定量(A/B/C) COL13A1 (Collagen alpha-1(XIII) chain) 20 ul
細(xì)胞PKCι激酶活性定量(A/B/C) CSF2RA (Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor receptor subunit alpha) 100 ul
組織PKCι激酶活性定量(A/B/C) CCDC88A (Girdin) 20 ul
TGF-β1 elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)Aromatase芳香化酶種屬: Stenotrophomonas│rhizophila Wolf et al.窄食單胞菌
arylhydrocarbon receptor芳香烴受體種屬: Ceriporiopsis│subvermispora (Pilát) Gilb. & Ryvarden蘋(píng)果針層孔菌
non-esterified fatty acid非酯化脂肪酸種屬: Eurotium│echinulatum刺孢散囊菌
Pulmonary surfatcant-associated protein A肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A種屬: Agaricus│blazei Murrill雞松茸
Pulmonary surfatcant-associated protein C肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C種屬: Paecilomyce│vinaceus酒紅擬青霉
Pulmonary surfatcant-associated protein D肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D種屬: Penicillium│pusillum細(xì)小青霉
Mhyopneumoniae antibody肺炎支原體抗體種屬: Microbacterium│hydrocarbonoxydans Schippers et al.氧化烴微桿菌
secreted phospholipase A2分泌型磷脂酶A2種屬: Bosea│sp.博斯氏菌
secretory immunoglobulin A分泌型免疫球蛋白A種屬: Fusarium│elegans雅致鐮孢
secretory immunoglobulin M分泌型免疫球蛋白M種屬: Ganoderma│sp.信州靈芝
Claudin-1封閉蛋白1種屬: Terribacillussp.土地芽胞桿菌屬
Calpain鈣蛋白酶種屬: Afipia│sp.阿菲波菌
Calcium-independent phospholipase A2鈣非依賴型磷脂酶A2種屬: Sarcoscypha│coccinea (Jacq.) Sacc.紅白毛杯菌
voltage-gated calcium channel鈣離子通道抗體種屬: Hypochnus│sp.衛(wèi)茅膏藥病
Glycine甘氨酸種屬: Pleurotus│ostreatus (Jacq.) P. Kumm.平菇?唐無(wú)孢
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