實(shí)驗(yàn)操作步驟：  

a．采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動(dòng)物。

b．立即在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)用70％乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。

c．用無(wú)菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無(wú)菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無(wú)菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無(wú)菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無(wú)菌的含有無(wú)菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品介紹：

名稱    大鼠肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞

2.組織來源：肝臟組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞分離自肝臟組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個(gè)器官，并在身體里面起著去氧化、儲(chǔ)存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里最大的器官，位于機(jī)體中的腹部位置，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中最大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機(jī)體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu)：肝臟位于右上腹，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復(fù)蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞是指具有肝功能的單位，是肝臟的基本組成單位之一。肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞與主要病生理變化：急性肝炎、肝硬化、肝膿腫。肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞屬于中高度分化細(xì)胞，生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)需求高，在體外存活時(shí)間短；細(xì)胞呈圓形或多角形，核大而圓，居中，常染色質(zhì)豐富，部分有雙核或多倍體核。肝臟作為體內(nèi)重要的器官，在整個(gè)物質(zhì)代謝過程中具有廣泛而多樣的作用。

5.方法簡(jiǎn)介：

()實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞采用混合酶灌流消化、反復(fù)低速離心制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

()實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號(hào)CM-R033

換液頻率每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣

傳代特性可傳1-2代

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

處理方法：

收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。并進(jìn)行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時(shí)后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3. 預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細(xì)胞密度較小，無(wú)菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上，進(jìn)行傳代。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得最佳實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

2 ug pBudCE4.1-EGFP pBudCE4.1-EGFP 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人真核翻譯起始因子2-α激3(EIF2AK3)ELISA試劑盒

氯化鈉血瓊脂基礎(chǔ) Sodium Chloride Blood Agar Base 250g 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Metalloproteinase inhibitor 2

25g 馬來酸鈉 Maleic Acid Disodium Salt Hydrate 室溫陰涼干燥保

大鼠肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞50次 一步法質(zhì)粒 DNAout 2.0 One-Step Plasmid DNAOUT 2.0 常溫保存(溶液A需4℃保存)

KCNN4  鈣激活鉀通道蛋白4抗體 規(guī)格: 0.1ml

50T 人血管生長(zhǎng)因子VEGF-cPCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存

2 ug pGEX-6P-1 pGEX-6P-1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

2 ug pAc5.1B-EGFP pAc5.1B-EGFP 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

CHDH/Choline dehydrogenase  脫抗體 規(guī)格: 0.2ml

10 mg Simvastatin（HMG-CoA Reductase抑制劑） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

1g 對(duì)鈉鹽 p-Nitrophenylphosphate Disodium Salt Hexahydrate（p-NPP） -20℃保存

STAT5b  信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5b抗體 規(guī)格: 0.2ml

50次 柱式BAC DNAout  Column BAC DNAOUT 常溫保存(RNase A溶液4℃保存)

Defensin β2/DEFB2/HBD-2  防御素β2抗體 規(guī)格: 0.1mlC1orf93  1號(hào)染色體開放閱讀框93抗體 規(guī)格: 0.2ml

1g  -3- 乙酸 IAA -20℃保存