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菌種的培養(yǎng)：

1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。

4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長時間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。

5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。

6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 [3] 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

2,2'-二二苯硫 98%桑色素 IndicatorMMP-9(matrix metalloproteinase 9)  基質(zhì)金屬蛋白-9(抗原)

3,3'-二羥基二苯二硫 97% 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%AGER(Advanced glycosylation end product-specific receptor)  晚期糖基化終末產(chǎn)物特異性受體(抗原）

3，5-二氯茴香硫 98%酮  分析標(biāo)準(zhǔn)品14-3-3 protein  14-3-3 蛋白（多肽抗原）

2,3-二氯噻吩 97%芒果苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%14-3-3 family protein(Malus domestica (Apple) (Malus sylvestris))  植物14-3-3蛋白抗原

2,5-二氯噻吩-3-磺酰 97%褪黑素 98%AIF　(Apoptosis-Inducing Factor)  調(diào)亡誘導(dǎo)因子(多肽片斷抗原）

3,5-二并噻吩 97%柚皮素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%Adenylate Kinase 1 (AK-1)  腺苷酸激-1

2,4-二溴苯 98%新綠原酸 99%Akt/PKB  蛋白激B（抗原）

2，4-二巰基嘧 98%三七皂甙 R1 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98% (HPLC)2,4-D/KLH(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid)  2，4-二氯苯氧乙酸偶聯(lián)血藍(lán)蛋白

中間葡萄球菌鄰二二壬酯(異構(gòu)體的混和物) 97%激活激PAK7抗體BTNL3  嗜脂蛋白樣3抗體

鄰二二壬酯 standard for GC, ≥99.5% (GC)孕激素誘導(dǎo)阻斷因子抗體BTNL2  嗜脂蛋白樣2抗體

鄰二二壬酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品增殖核抗原抗體BTN2A2  嗜脂蛋白亞家族2成員A2抗體

鄰二二異壬酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99.5%增殖核抗原抗體BTK/ATK  蛋白酪氨激ATK抗體

鄰二二異壬酯 99%piwi樣1蛋白抗體BTG4  B遷移因4抗體

異辛  >99.0%(GC)血小板源性生長因子A抗體BTG3  高表達(dá)神經(jīng)上皮蛋白BTG3抗體

偏三三辛酯 97%泌素抗體BTG2/TIS21  B遷移因2抗體

N-叔丁氧羰-去托品酮 98%血小板源性生長因子-B抗體BTG1  B遷移因1抗體

N-芐托品酮 97%血小板源性生長因子受體A抗體(PDGFRα)BTF/BCLAF1  Bcl2相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體

18-冠-6 99%血小板源性生長因子受體B抗體(PDGFRβ)BTBD7  BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體

15-冠-5 97%酮脫氫激4抗體BTBD6  BTBD6蛋白抗體

3-乙氧酰磺鹽 98%色素上皮源性因子抗體BTBD3  BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體

2(5H)-呋喃酮 98%肝癌高表達(dá)因抗體BTBD19  BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白19抗體

(S)-(-)-β-羥- 96%腸道肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1/小肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體BTBD17  BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體

(S)-3-羥四 98%腸道肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體BTBD10  BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白10抗體

微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng)，有時母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

⑵ 種子罐種子制備　

種子罐種子制備的工藝過程，因菌種不同而異，一般可分為一級種子、二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為一級種子，把一級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為二級發(fā)酵。如果將一級種子接入體積較大的種子罐內(nèi)，經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級種子，將二級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為三級發(fā)酵。同樣道理，使用三級種子的發(fā)酵，稱為四級發(fā)酵。