血管外膜成纖維細(xì)胞-上海谷研實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	GOY-01X1276

使用方法：

收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

3. 細(xì)胞傳代

1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；

3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4) 待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供最新價(jià)格、說(shuō)明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

產(chǎn)品名稱	血管外膜成纖維細(xì)胞
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
分類	原代細(xì)胞
貨號(hào)	GOY-01X1276

商品介紹：

名稱 血管外膜成纖維細(xì)胞

2.組織來(lái)源：血管組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人血管外膜成纖維細(xì)胞分離自血管外膜組織；血管外膜是由疏松結(jié)締組織組成，其中含螺旋狀或縱向分布的彈性纖維和膠原纖維。血管壁的結(jié)締組織細(xì)胞以成纖維細(xì)胞為主，當(dāng)血管受損傷時(shí)，成纖維細(xì)胞具有修復(fù)外膜的能力。有的動(dòng)脈中膜和外膜的交界處，有密集的彈性纖維組成的外彈性膜。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的血管外膜成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。血管外膜成纖維細(xì)胞是血管外膜的主要組成細(xì)胞之一，其主要生理功能合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時(shí)大量聚集修復(fù)損傷組織。

5.方法簡(jiǎn)介：

()實(shí)驗(yàn)室分離的人血管外膜成纖維細(xì)胞采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

()實(shí)驗(yàn)室分離的人血管外膜成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號(hào)CM-H200

換液頻率每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣

傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓脫落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
圖片13.jpg

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

250U Tth DNA聚合 Tth DNA Polymerase -20℃保存

250mL PBlec Washing Solution in PBS,pH7.0,2X PBlec Washing Solution in PBS,pH7.0,2X 常溫保存

20次裂殖酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒（含高效轉(zhuǎn)化液） S. pombe Chemical Competent Cell Preparation Kit 常溫

50T 水貂腸炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒低溫運(yùn)輸，-20℃保存

RNS培養(yǎng)基 ?嵌?L?

血管外膜成纖維細(xì)胞無(wú)菌均質(zhì)袋（不帶壓條）英文名稱：Sterile Homogeneous Bag 產(chǎn)品規(guī)格：100個(gè)/包豬環(huán)腺苷(cAMP)免疫試劑盒*直銷

無(wú)菌采樣袋（12cm*18cm）（帶壓條）英文名稱：Aseptic Sampling Bag 產(chǎn)品規(guī)格：100個(gè)/包豬環(huán)鳥苷(cGMP)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

無(wú)菌水樣采集袋(含0.4mg硫代) 英文名稱：Water Aseptic Sampling Bag 產(chǎn)品規(guī)格：100個(gè)/箱豬化學(xué)趨化因子(KC)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基管（液體）含拭子英文名稱：產(chǎn)品規(guī)格：10ml×20支豬紅細(xì)胞生成素(EPO)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

無(wú)菌取樣袋（帶鐵絲）（30cm*18cm）英文名稱：產(chǎn)品規(guī)格：50個(gè)/包*4 豬黑素皮質(zhì)素受體-2(MC2R)免疫試劑盒*直銷

2.5L厭氧產(chǎn)氣包英文名稱：Anaerobic gas producting bag 產(chǎn)品規(guī)格：10個(gè)/包豬核因子-κB(NF-κB)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

氧氣指示劑英文名稱：Oxygen indicator 產(chǎn)品規(guī)格：1.5ml/支*10 豬核受體亞家族1,H組,成員4(NR1H4)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

2.5L圓底立式厭氧培養(yǎng)袋英文名稱：2.5L Round bottom vertical anaerobic culture bag 產(chǎn)品規(guī)格：10個(gè)/包豬含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域酪激2(Tie-2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

2.5L微需氧產(chǎn)氣包英文名稱：產(chǎn)品規(guī)格：10個(gè)/包豬胱抑素C(CST3/Cys-C)免疫試劑盒*直銷

350ml厭氧培養(yǎng)袋英文名稱：產(chǎn)品規(guī)格：10個(gè)/包豬胱硫醚β合(CBS)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝