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菌種的培養(yǎng)：

1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進一步擴大菌體量及合成產(chǎn)物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。

4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。

5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。

6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 [3] 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

Anti-PAK2 /FITC  熒光素標(biāo)記p21激活激2抗體IgG

Anti-Phospho-PAK2 (Ser20) /FITC  熒光素標(biāo)記化p21激活激2抗體IgG

Anti-PAK4/FITC  熒光素標(biāo)記p21激活激4抗體IgG

Phospho-PAK4 (Ser474)/PAK5 (Ser602)/PAK6 (Ser560) /FITC  熒光素標(biāo)記化p21激活激4、5、6抗體IgG

Anti-PAK7/PAK5/MBT/FITC  熒光素標(biāo)記抗激活激PAK7/PAK5抗體IgG

Anti--phospho-P70 S6 Kinase beta (Thr228) /FITC  熒光素標(biāo)記抗化核糖體S6蛋白激抗體IgG

Anti-Phospho-p70 S6 Kinase Beta (Thr421/Ser424) /FITC  熒光素標(biāo)記化核糖體S6蛋白激β2抗體IgG

Anti-phospho-P70 S6 Kinase beta (Ser371)/FITC  熒光素標(biāo)記化核糖體S6蛋白激抗體IgG

Bacillusfirmus3-聯(lián) 98%兔子CD34分子(CD34)免疫試劑盒胞苷尿苷鳥苷結(jié)合蛋白1抗體Rabbit anti-mouse Kappa light chain/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈

3,4-二氧溴 98%兔子B淋巴瘤因子2(Bcl-2)免疫試劑盒原腸胚雙向形成相關(guān)蛋白抗體Rabbit anti-mouse Kappa light chain/PE  PE標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈

3,4-二溴 99%兔子8羥脫氧鳥苷(8-OHdG)免疫試劑盒分裂周期蛋白CDC123抗體Rabbit anti-mouse Kappa light chain/HRP  辣根過氧化物標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈

4-芐氧-2-氟 96%兔子6-酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)免疫試劑盒神經(jīng)蠟樣質(zhì)脂褐質(zhì)沉積病蛋白CLN3抗體Rabbit anti-mouse Kappa light chain/Gold  膠體金標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈

2-聯(lián) 97%兔子Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)免疫試劑盒趨化素樣因子超家族成員3抗體Rabbit anti-mouse Kappa light chain/FITC  FITC標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈

4-(Boc-氨) 97%兔子4-羥壬烯(HNE)免疫試劑盒染色質(zhì)修飾蛋白1B抗體Rabbit anti-mouse Kappa light chain/Cy7  Cy7標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈

并噻吩-2-  98%兔子Ⅲ型前膠原氨末端肽(PⅢNP)免疫試劑盒冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白抗體Rabbit anti-mouse Kappa light chain/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈

4-叔丁 97%兔子Ⅲ型前膠原氨端肽(PⅢNT)免疫試劑盒連接相關(guān)蛋白1抗體Rabbit anti-mouse Kappa light chain/Cy5  Cy5標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈

4-芐氧  97%兔子Ⅲ型前膠原(HPCⅢ)免疫試劑盒連接相關(guān)蛋白2抗體Rabbit anti-mouse Kappa light chain/Cy3  Cy3標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈

4-溴  97%兔子Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)免疫試劑盒化周期素依賴性激5抗體Rabbit anti-mouse Kappa light chain/Bio  標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈

3,5-雙（三氟） 97%兔子Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)免疫試劑盒異戊烯半胱氨羧轉(zhuǎn)移抗體Rabbit anti-mouse Kappa light chain/APC  APC標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈

3-芐氧-2,6-二氟 97%兔子Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)免疫試劑盒核苷交換因子CLLD7抗體Rabbit anti-mouse Kappa light chain/AP  堿性（AP）標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈

2-丁氧 97%兔子Ⅱ型肺泡表面抗原(KL-6)免疫試劑盒趨化素樣因子超家族成員4抗體Rabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈

4-溴-2-(三氟) 97%兔子Ⅰ型前膠原羧端肽(PⅠCP)免疫試劑盒趨化素樣因子超家族成員7抗體Rabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈

4-溴-2-三氟酚 99%兔子Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)免疫試劑盒趨化素樣因子超家族成員5抗體Rabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈

微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng)，有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

⑵ 種子罐種子制備　

種子罐種子制備的工藝過程，因菌種不同而異，一般可分為一級種子、二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為一級種子，把一級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為二級發(fā)酵。如果將一級種子接入體積較大的種子罐內(nèi)，經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級種子，將二級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為三級發(fā)酵。同樣道理，使用三級種子的發(fā)酵，稱為四級發(fā)酵。