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淀粉磷酸化酶(SP)紫外分光光度法

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更新時(shí)間:2022-04-27 11:54:52瀏覽次數(shù):169次

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科研抗體
科研菌種
生化檢測(cè)試劑盒
科研細(xì)胞
貨號(hào) GOY-01S6694
淀粉磷酸化酶(SP)紫外分光光度法檢測(cè)試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品:NFkB p100/p52 細(xì)胞核因子p100/p52k基因結(jié)合核因子抗體 規(guī)格: 0.1ml
EDNRA 內(nèi)皮素受體A抗體 規(guī)格: 0.1ml
BRMS-1 轉(zhuǎn)移抑制基因1抗體 規(guī)格: 0.1ml
VMAT2 腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Syntrophins/SNTA1/Syntrophin Alph

選擇抗凝的注意點(diǎn):

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

28.png 

商品屬性:

產(chǎn)品名稱

淀粉磷酸化酶(SP)紫外分光光度法

規(guī)格

50管/48樣

檢測(cè)方法

紫外分光光度法

貨號(hào)

GOY-01S6694

商品介紹:

測(cè)定意義

淀粉磷酸化酶(Starch Phosphorylase,SP)是淀粉代謝過程的可逆反應(yīng)酶,既可催化淀粉的合成,也可催化淀粉的分解。

在高等植物中,淀粉磷酸化酶(合成方向)主要存在于質(zhì)體中,負(fù)責(zé)延長淀粉的 α-1,4-葡萄糖鏈的非還原末端;淀粉磷酸化酶(分解方向)主要存在于細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中,催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵磷酸解產(chǎn)生葡萄糖-1-磷酸,負(fù)責(zé)葡萄糖鏈的磷酸解,是淀粉代謝過程中的關(guān)鍵酶。

在植物體中,淀粉磷酸化酶分解方向的底物無機(jī)磷濃度比合成方向的底物葡萄糖-1-磷酸濃度幾乎高了兩個(gè)數(shù)量級(jí),一般認(rèn)為淀粉磷酸化酶只催化淀粉的分解,因此,分解方向的淀粉磷酸化酶具有重要測(cè)定意義。

測(cè)定原理:

淀粉磷酸化酶催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵與無機(jī)磷反應(yīng)產(chǎn)生葡萄糖-1-磷酸,葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖變位酶的作用下產(chǎn)生葡萄糖-6-磷酸,并在6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化下還原NADP+產(chǎn)生NADPH,使340nm下吸光值增加。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50100μl濕潤管壁,可抗凝人血35ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔510分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置12小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。

羅丹明B ≥99.0% (HPLC) 氟離子(F-)標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000mg/L,基體:水Anti-Phospho-Ack1(Tyr857/858) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、小鼠化Ack1抗體IgG

羅丹明B 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.0% (HPLC) 金標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-Phospho-Ack1(Tyr326) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化Ack1抗體IgG

過氧化鈉 ACS reagent, ≥93.0%金標(biāo)準(zhǔn)溶液100.0μg/g,基體:0.5mol/l鹽酸Anti-ACTH 1-39/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠ACTH抗體IgG

過氧化鈉 95%金標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/mlAnti-ACTH(7-23)/FITC  熒光素標(biāo)記促皮質(zhì)(7-23)抗體IgG

AR鎵標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlACTH(18-39)/FITC  熒光素標(biāo)記ACTH(18-39)抗體IgG

磺基AR,99%鍺標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-Actin Alpha /Alpha-SMA/FITC  熒光素標(biāo)記Actin α 蛋白抗體IgG

磺基 CP,98%釓標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-Actin Alpha / Alpha-SMA/RBITC  紅色熒光素標(biāo)記肌動(dòng)蛋白α抗體IgG

鄰苯二甲酸氫鈉 AR,99.8%釓標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000µg/mL,基體:10%HClAnti- Beta-Actin/FITC  熒光素標(biāo)記β-肌動(dòng)蛋白抗體IgG

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