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吲哚乙酸氧化酶微量法檢測試劑盒

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更新時間:2022-04-28 11:21:21瀏覽次數(shù):226次

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ATCC細(xì)胞
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生化檢測試劑盒
科研細(xì)胞
貨號 GOY-01S7020
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商品屬性:

產(chǎn)品名稱

吲哚乙酸氧化酶微量法檢測試劑盒

規(guī)格

100管/96樣

檢測方法

微量法

貨號

GOY-01S7020

商品介紹:

測定意義

吲哚乙酸(IAA)在吲哚乙酸氧化酶的作用下,被氧化破壞失去活性。植物體內(nèi)吲哚乙酸氧化酶活力的大小,對調(diào)節(jié)體內(nèi)吲哚乙酸的水平,起著重要的作用,而影響植物的生長。

測定原理:

在無機酸存在情況下,吲哚乙酸能與FeCl3作用,生成紅色螯合物,該物質(zhì)在530nm處有最大吸收峰,酶活力的大小可以其破壞吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法測定。

自備儀器和用品:

低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計、1.5mL離心管、1mL玻璃比色皿、和蒸餾水。

實驗方法學(xué):

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50100μl濕潤管壁,可抗凝人血35ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔510分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置12小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

二甲氧烷 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.8% (GC)三氧化二銻 AR,99.5%Anti-IL-14/Taxilin alpha/FITC  熒光素標(biāo)記抗白介素14抗體IgG

3,5-二甲酸 CP,98%三氧化二銻 99.9%,平均粒徑:0.7 µmAnti-IL-15/FITC  熒光素標(biāo)記白介素15抗體IgG

3,5-二甲酸 99.0%三氧化二銻 99.999% metals basisAnti-IL-15R Alpha/FITC  熒光素標(biāo)記白介素15受體α抗體IgG

3,5-二苯甲酸 98%三氧化二銻 CP,99%Anti-IL-16/FITC   熒光素標(biāo)記白介素-16抗體IgG

α-甲基烯酸 >99.0%(GC),250ppm MEHQ做穩(wěn)定劑活性氧化鋁 40-60目 GCAnti-IL-16/FITC  熒光素標(biāo)記白介素16抗體IgG

α-甲基烯酸 CP,98%活性氧化鋁 60-80目 GCAnti-IL-17/FITC  熒光素FITC標(biāo)記白介素-17抗體IgG

甲基烯酸甲酯 AR,99.0%活性氧化鋁 80-100目 GCAnti-IL-17B/FITC  熒光素標(biāo)記白介素-17B抗體IgG

5-硝基間苯二甲酸 98%氟化鋁 99.9% metals basisAnti-IL-17/PE  熒光素PE標(biāo)記白介素-17抗體IgG

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操作步驟:

實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。

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