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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>蛋白含量測(cè)定系列>> 丙酮酸羧化酶(PC)紫外分光光度法
貨號(hào) | GOY-01S6979 |
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【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購買說明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
50管/48樣 | 紫外分光光度法 | GOY-01S6979 |
商品介紹
測(cè)定意義 丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase,PC,EC 6.4.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、霉菌和酵母的線粒體中,催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi,是糖異生過程的第一個(gè)限速酶,在保證血糖的動(dòng)態(tài)平衡方面起著重要的作用。 測(cè)定原理: PC催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi,蘋果酸脫氫酶進(jìn)一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋果酸和NAD+,在340nm下測(cè)定NADH氧化速率,即可反映PC活性。 需自備的儀器和用品: 分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通常可以使測(cè)定正常。
Anti-Phospho-Tuberin/TSC2 (Thr1462)/FITC 熒光素標(biāo)記化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體IgG
Anti-VTG/HRP 辣根過氧化物標(biāo)記兔抗魚、青鳉魚卵黃蛋白原抗體IgG
Anti-Tumstatin/Col4a3/FITC 熒光素標(biāo)記腫瘤抑素抗體IgG
Anti-TWIST protein/FITC 熒光素標(biāo)記TWIST轉(zhuǎn)錄因子蛋白抗體IgG
Rabbit Anti-human Fibrinogen/HRP 辣根過氧化物標(biāo)記可溶性纖抗體IgG
Rabbit Anti-human Fibrinogen/FITC 熒光素標(biāo)記纖IgG
Goat Anti-human Fibrinogen/HRP 辣根過氧化物標(biāo)記羊抗人纖
Anti-TY3H/FITC (Tyrosine Hydroxylase ) 熒光素標(biāo)記羥化抗體IgG
丙酮酸羧化酶(PC)紫外分光光度法信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子3(STAT3)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
小鼠TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)免疫試劑盒*直銷
小鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(IgG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
小鼠細(xì)胞周期素D3(Cyclin-D3)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
鯊魚雌二醇(E2)免疫試劑盒*直銷
大鼠補(bǔ)體片斷5a(C5a)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SP-B)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
類猿黃體生成素(LH)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
大鼠精加壓素受體1A(AVPR1A)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
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