實(shí)驗(yàn)操作步驟：  

a．采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動(dòng)物。

b．立即在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)用70％乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。

c．用無(wú)菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無(wú)菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無(wú)菌的剪刀和鑷子切開(kāi)腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無(wú)菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無(wú)菌的含有無(wú)菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品介紹：

名稱    大鼠胚胎干細(xì)胞

2.組織來(lái)源：囊胚

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠胚胎干細(xì)胞分離自囊胚胚胎組織；胚胎干細(xì)胞（Embryonic stem cell，ESCs，簡(jiǎn)稱ES、EK或ESC細(xì)胞）是早期胚胎（原腸胚期之前）或原始性腺中分離出來(lái)的一類細(xì)胞，它具有體外培養(yǎng)無(wú)限增殖、自我更新和多向分化的特性。無(wú)論在體外還是體內(nèi)環(huán)境，ES細(xì)胞都能被誘導(dǎo)分化為機(jī)體幾乎所有的細(xì)胞類型。進(jìn)一步說(shuō)，胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）是一種高度未分化細(xì)胞。它具有發(fā)育的全能性，能分化出成體動(dòng)物的所有組織和器官，包括生殖細(xì)胞。ES細(xì)胞具有與早期胚胎細(xì)胞相似的形態(tài)結(jié)構(gòu)，細(xì)胞核大，有一個(gè)或幾個(gè)核仁，胞核中多為常染色質(zhì)，胞質(zhì)胞漿少，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單。體外培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞排列緊密，呈集落狀生長(zhǎng)。用堿性磷酸酶染色，ES細(xì)胞呈棕紅色，而周圍的成纖維細(xì)胞呈淡黃色。細(xì)胞克隆和周圍存在明顯界限，形成的克隆細(xì)胞彼此界限不清，細(xì)胞表面有折光較強(qiáng)的脂狀小滴。細(xì)胞克隆形態(tài)多樣，多數(shù)呈島狀或巢狀。小鼠ES細(xì)胞的直徑7 微米～18 微米，豬、牛、羊ES細(xì)胞的顏色較深，直徑12 微米～18 微米。胚胎干細(xì)胞與普通細(xì)胞有顯著差別，有其特定的生長(zhǎng)特性和特定的標(biāo)志，例如堿性磷酸酶活性非常高，帶有胚胎階段特異性表面抗原（ Stage- specific embryonic antigens,SSEA），人類胚胎干細(xì)胞還帶有高分子量的糖蛋白TRA1-60、TRA-1-81等標(biāo)志，這些特性和標(biāo)志均可以用于對(duì)胚胎干細(xì)胞進(jìn)行鑒定，除此之外，胚胎干細(xì)胞還可以在體外傳代，并保持正常核型。在體外培養(yǎng)體系中加入分化抑制劑如白血病抑制因子（ Leukaemia inhibitory factor,LF）或者在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層（MEF）上培養(yǎng)時(shí)，胚胎干細(xì)胞都能呈克隆性增殖，長(zhǎng)期保持核型正常和穩(wěn)定，凍存解凍也不影響不分化的特性。另外，胚胎干細(xì)胞還表現(xiàn)岀高水平端粒酶活性，目前證明端粒酶與細(xì)胞衰老密切相關(guān)，多數(shù)成熟細(xì)胞的端粒酶活性都很低。這些都是胚胎干細(xì)胞與成熟細(xì)胞不同的重要特點(diǎn)，也可能是其復(fù)制生命期限遠(yuǎn)比體細(xì)胞長(zhǎng)的原因。

5.方法簡(jiǎn)介：

()實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胚胎干細(xì)胞采用分離囊胚組織，去除胚胎透明帶、使用特制專用培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)，消化傳代純化制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

()實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胚胎干細(xì)胞經(jīng)Oct-4免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件明膠（0.1%）

培養(yǎng)基含LIF、BMP、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號(hào)CM-R320

換液頻率每2-3天換液一次；

生長(zhǎng)特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)短梭形、多角形

傳代特性可傳5-8代左右

消化液0.025%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

處理方法：

收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問(wèn)題，請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。并進(jìn)行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時(shí)后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3. 預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細(xì)胞密度較小，無(wú)菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上，進(jìn)行傳代。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得最佳實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，

避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

通用型LB細(xì)培養(yǎng)液  500毫升

細(xì)（青）敏感性DISC彌散（KIRBY-BAUER）檢測(cè)試劑盒  20次

細(xì)（氨卞青）敏感性DISC彌散（KIRBY-BAUER）檢測(cè)試劑盒  20次

細(xì)（羧卞青）敏感性DISC彌散（KIRBY-BAUER）檢測(cè)試劑盒  20次

細(xì)（CEFIXIME）敏感性DISC彌散（KIRBY-BAUER）檢測(cè)試劑盒  20次

細(xì)（MOXALACTAM）敏感性DISC彌散（KIRBY-BAUER）檢測(cè)試劑盒  20次

細(xì)（慶大）敏感性DISC彌散（KIRBY-BAUER）檢測(cè)試劑盒

大鼠胚胎干細(xì)胞吖啶黃素進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)每支添加于225ml HB4150、HB4192中（SN、GB標(biāo)準(zhǔn)）3.75mg/支*5兔P物質(zhì)受體(SP-R)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂(TSA-YE)   進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Trypticase Soy-Yeast Extract Agar用于單增李氏菌的分純，培養(yǎng)，可用于做7%羊血瓊脂（SN標(biāo)準(zhǔn)）250兔p物質(zhì)(SP)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

李氏菌選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ)(MMA)  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Modified Mcbride Agar Base用于單增李氏菌選擇性分離（SN標(biāo)準(zhǔn)）250兔p53(p53)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)每支添加于 100ml HB41553mg/支*5兔N端前腦鈉素(NT-proBNP)免疫試劑盒*直銷

糖發(fā)酵基礎(chǔ)肉湯   進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Bromcresol Purple Broth Base適用于微生物檢驗(yàn)中各種糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，無(wú)菌加入各種糖醇類物質(zhì)（SN標(biāo)準(zhǔn)）250兔NADPH氧化1(NOX1)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

李氏菌增菌肉湯(LB1,LB2)基礎(chǔ)    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Listeria Enrichment Broth Base添加奈啶酮酸，吖啶黃素，即為L(zhǎng)B1，LB2，用于李氏菌二步增菌（GB標(biāo)準(zhǔn)）250兔C肽(C-Peptide)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

七葉苷培養(yǎng)基   進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Esculin Medium生化試驗(yàn)培養(yǎng)基，用于細(xì)菌七葉苷利用試驗(yàn)（SN標(biāo)準(zhǔn)）10兔CD8分子(CD8)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

半固體動(dòng)力培養(yǎng)基  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Motility Test Medium(Semisolid)用于動(dòng)力觀察，菌種保存，H抗原位相變異試驗(yàn)等（SN標(biāo)準(zhǔn)）250兔CD4分子(CD4)免疫試劑盒*直銷

牛津瓊脂(OXA)基礎(chǔ)   進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Oxford Agar Base用于單增李氏菌的選擇性分離250兔Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

E進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)添于100ml HB4171中2mg/支*5兔ADAM金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白1型13(ADAMTS13)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝