產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品介紹：

名稱    小鼠心臟干細(xì)胞

2.組織來(lái)源：心臟組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠心臟干細(xì)胞分離自心臟組織；心臟是脊椎動(dòng)物身體中最重要的一個(gè)器官，主要功能是為血液流動(dòng)提供壓力，把血液運(yùn)行至身體各個(gè)部分。心臟由心肌構(gòu)成，左心房、左心室、右心房、右心室四個(gè)腔組成。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開(kāi)，故互不相通，心房與心室之間有瓣膜（房室瓣），這些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流。心臟的作用是推動(dòng)血液流動(dòng)，向器官、組織提供充足的血流量，以供應(yīng)氧和各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并帶走代謝的終產(chǎn)物（如二氧化碳、無(wú)機(jī)鹽、尿素和尿酸等），使細(xì)胞維持正常的代謝和功能。研究發(fā)現(xiàn)，心臟干細(xì)胞是一種多潛能細(xì)胞，具有再生和克隆能力，并可分化為心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞。體內(nèi)研究顯示，從心臟中分離出的心臟干細(xì)胞，經(jīng)體外簡(jiǎn)單培養(yǎng)、增殖和標(biāo)記后，移植到心肌梗死邊緣區(qū)域，心梗血流動(dòng)力學(xué)和心室壁厚度較對(duì)照組明顯改善，心肌梗死邊緣區(qū)域發(fā)現(xiàn)有標(biāo)記的心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞。盡管其新生心肌細(xì)胞較小，但表達(dá)一些特殊肌蛋白如心臟肌球蛋白重鏈、α-肌動(dòng)蛋白、α-輔肌動(dòng)蛋白、連接蛋白等，證實(shí)了心臟干細(xì)胞對(duì)心肌梗死的修復(fù)作用。干細(xì)胞移植治療是目前心肌梗死和缺血性心臟病細(xì)胞重建的主要方法，成體干細(xì)胞中的c-kit陽(yáng)性心臟干細(xì)胞因其來(lái)源于心臟，有定向心臟細(xì)胞系分化的趨勢(shì)，體內(nèi)外可以分化成心肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞，同時(shí)自體移植不存在免疫排斥反應(yīng)及倫理問(wèn)題已經(jīng)成為目前研究的熱點(diǎn)。短期內(nèi)獲得治療量的自體心臟干細(xì)胞是這一治療應(yīng)用于臨床的關(guān)鍵所在。因此，研究一種新的分離培養(yǎng)方法可在短時(shí)期內(nèi)獲得大量純度較高的自體c-kit陽(yáng)性心臟干細(xì)胞成為目前干細(xì)胞領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)問(wèn)題之一。

5.方法簡(jiǎn)介：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠心臟干細(xì)胞采用機(jī)械剪碎組織、膠原酶分次消化法結(jié)合差速貼壁、心臟干細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠心臟干細(xì)胞經(jīng)c-kit免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號(hào)CM-M135

換液頻率每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)長(zhǎng)梭形

傳代特性可傳2-3代左右

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

處理方法：

收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問(wèn)題，請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。并進(jìn)行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時(shí)后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3. 預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細(xì)胞密度較小，無(wú)菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上，進(jìn)行傳代。

實(shí)驗(yàn)操作步驟：  

a．采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動(dòng)物。

b．立即在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)用70％乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。

c．用無(wú)菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無(wú)菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無(wú)菌的剪刀和鑷子切開(kāi)腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無(wú)菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無(wú)菌的含有無(wú)菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得最佳實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，

避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

1 g HDAC抑制劑 Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存 78-5000 pg/mL 人鱗狀細(xì)胞癌抗原1(SCCA1)ELISA試劑盒

100mL DIPSO Buffer,0.2M,pH7.0  DIPSO Buffer,0.2M,pH7.0  常溫保存 0.312-20 ng/mL 人神經(jīng)連接蛋白4,X連鎖(Neuroligin X)ELISA試劑盒

10mL 超級(jí)雜交液（Oligo探針） SuperHyb Solution for Oligo -

小鼠心臟干細(xì)胞TRPC6  瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白6抗體 規(guī)格: 0.1ml

BFSP2/Phakinin  晶狀體蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-c-Raf(Ser296)  磷酸化原基因c-Raf抗體 規(guī)格: 0.1ml

PFK2/PFKFB3  6磷酸果糖激2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Fascin1  纖維束1抗體 規(guī)格: 0.1ml

TEP1  端粒相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-IKK beta(S474)  磷酸化KB抑制蛋白激β抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-IFNAR1(Ser535+Ser539)  磷酸化干擾素α受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-RPA32/RPA2(Thr21)  磷酸化復(fù)制因子A蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml

P14ARF/CDKN2A  抑基因p16抗體 0.1mlox-LDL  氧化脂蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

SCN3B  電壓門控鈉通道SCN3B蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

SRRM2  /氨酸相關(guān)核基質(zhì)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

200次 一管式病毒DNAout One-Tube Viral DNAOUT 常溫

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。