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細(xì)胞損傷或死亡時(shí),臺(tái)盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜,與解體的DNA 結(jié)合,使其著色。而活細(xì)胞能阻止染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。故可以鑒別死細(xì)胞與活細(xì)胞。
用品:
1. 4%臺(tái)盼藍(lán)母液:稱取4g臺(tái)盼藍(lán),加少量蒸餾水研磨,加雙蒸水至100ml,用濾紙過(guò)濾,4度保存。使用時(shí)。用PBS稀釋至0.4%。 2. 吸管、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、顯微鏡
步驟:
1、制備單細(xì)胞懸液。并作適當(dāng)稀釋(106 細(xì)胞/ml) 2、染色:細(xì)胞懸液與0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液以9:1混合混勻。 3、計(jì)數(shù):在三分鐘內(nèi),用計(jì)數(shù)板分別計(jì)數(shù)活細(xì)胞和死細(xì)胞
結(jié)果統(tǒng)計(jì):
鏡下觀察,死細(xì)胞被染成淡藍(lán)色,而活細(xì)胞拒染。 根據(jù)下式求細(xì)胞活力:
活細(xì)胞率(%)= 活細(xì)胞總數(shù)/(活細(xì)胞總數(shù)+死細(xì)胞總數(shù))×100
注意事項(xiàng):臺(tái)盼藍(lán)染細(xì)胞時(shí),時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。否則,部分活細(xì)胞也會(huì)著色,會(huì)干擾計(jì)數(shù)。
臺(tái)盼藍(lán)染色原理
通常認(rèn)為細(xì)胞膜喪失完整性,細(xì)胞即可被認(rèn)為已經(jīng)死亡。臺(tái)盼藍(lán)(Trypan Blue)是檢測(cè)細(xì)胞膜完整性常用的生物染色試劑。健康的正常細(xì)胞能夠排斥臺(tái)盼藍(lán),而死亡的細(xì)胞,膜的完整性喪失,通透性增加,細(xì)胞可被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色。依據(jù)此原理,細(xì)胞經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色后,可通過(guò)顯微鏡,直接鏡下計(jì)數(shù)或拍照后計(jì)數(shù),實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞存活率比較的定量分析。
進(jìn)口原裝elisa試劑盒試述臺(tái)盼藍(lán)染發(fā)鑒別死活細(xì)胞的原理,試分析染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)本來(lái)是活細(xì)胞也被染色的原因
死細(xì)胞的細(xì)胞膜無(wú)屏障作用,臺(tái)盼藍(lán)馬上進(jìn)入細(xì)胞而顯藍(lán)色?;罴?xì)胞細(xì)胞膜有選擇透性,對(duì)臺(tái)盼藍(lán)的透性小,進(jìn)入細(xì)胞慢。若染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng),臺(tái)盼藍(lán)可能通過(guò)胞吞或胞飲作用進(jìn)入細(xì)胞。
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