elisa定量檢測(cè)試劑盒蛋白激索顯然是不均一的，其在血液循環(huán)中除了有生物學(xué)活性形式外，還有前激索、片段和亞單位。富甲狀腺索（PTH）、ACTH及其前體、催乳索和促胃液索的大的形式以及生長(zhǎng)激索的拼接變異體等均可引起測(cè)定問(wèn)題。使用單克隆抗體的兩位點(diǎn)雙夾心測(cè)定大大改善測(cè)定的特異性，例如使用抗絨毛膜促性腺激索的。和P亞單位的單抗建立的雙夾心方法將不會(huì)測(cè)定游離的亞單位。使用針對(duì)ACTH或PTH的氨基和羧基末端部分的兩個(gè)抗體建立的雙夾心方法則不會(huì)測(cè)定無(wú)生物學(xué)活性的片段。一般情況下，所希望測(cè)定的是具有生物學(xué)活性的成分，但有時(shí)為了某些特定的臨床目的，則需要有特異的試驗(yàn)來(lái)測(cè)定降解產(chǎn)物，如hCG的核心成分。因此，為保證elisa定量檢測(cè)試劑盒測(cè)定的特異性，就不僅要求有具有生物學(xué)活性的激索標(biāo)準(zhǔn)晶，而且要有臨床上相關(guān)的降解產(chǎn)物的標(biāo)準(zhǔn)品。
某些血清蛋白有在等電點(diǎn)上不同聚合程度不同（如觸珠蛋白）的各種遺傳變異體，盡管這些變異體的比例不同會(huì)影響其免疫測(cè)定的結(jié)果，但這并不是血清蛋白免疫測(cè)定的突出問(wèn)題。用于血漿蛋白測(cè)定的試驗(yàn)通常使用多克隆抗血清，多克隆抗體測(cè)定不了蛋白結(jié)構(gòu)上的微小差異。相反，使用單克隆抗體則有可能測(cè)不到某些變異體，這是血清蛋白免疫測(cè)定上的一個(gè)普遍問(wèn)題糖蛋白的不均一性主要在于糖基化尤其是唾液酸含量的差異，唾液酸含量上的差異進(jìn)而引起蛋白等電點(diǎn)和電泳移動(dòng)性的差異。抗體通常對(duì)這些差異不敏感，因此，糖的不均一性對(duì)免疫反應(yīng)性影響很小。然而蛋白上的糖鏈可通過(guò)修飾或覆蓋一個(gè)肽決定基而改變蛋白的免疫反應(yīng)性。相反，黏蛋白的主要抗原決定基則由糖成分所組成。免疫測(cè)定實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)上小的差異也會(huì)引起多態(tài)性抗原測(cè)定結(jié)果上較大的差異，黏蛋白抗原CA125,CA19―9和CA15―3的測(cè)定可以很明確的證明這一點(diǎn)。例如，由不同組織產(chǎn)生的CA15―3含有不同數(shù)量的20個(gè)氨基酸的串聯(lián)重復(fù)序列，而試驗(yàn)中測(cè)定抗原所用的單抗是用腫瘤細(xì)胞制備的，因而所測(cè)定的抗原是結(jié)構(gòu)不太明確的大分子。盡管大多數(shù)試劑廠家均使用相同的標(biāo)準(zhǔn)品和抗體，但其相互之間的相關(guān)性很差，這很可能是由于elisa定量檢測(cè)試劑盒在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)上的差異所致，因此每一種方法都應(yīng)有各自的參考范圍值。