Anti-ARF6抗體 基因擴(kuò)增儀凍干多肽的溶解

1、多肽溶解的主要問題是二級結(jié)構(gòu)的形成。雖然疏水肽鏈二級結(jié)構(gòu)的形成更明顯，但除zui短的肽鏈外，此現(xiàn)象產(chǎn)生在幾乎所有肽鏈,與極性無關(guān)。所以，溶解多肽的*個(gè)原則是使用無菌蒸餾水或去離子水，當(dāng)然無氧水。多肽溶液可能遇到細(xì)菌降解，為防止此情況的發(fā)生，應(yīng)溶解在無菌的蒸餾水中或用0.45或0.2孔徑的濾膜過濾除菌。含有Cys、Met、Trp的多肽很容易氧化，應(yīng)溶于無氧的水中，無氧水可通過注入惰性氣體（氮、氦、氬）減壓除氣得到；

2、若多肽不溶于純水，超聲處理有助于打碎顆粒并增加溶解度。注意:超聲處理會引起溶液發(fā)熱或多肽降解；

3、若多肽含有多個(gè)堿性氨基酸，使用（1-10%）的乙酸水溶液：對于疏水性強(qiáng)的多肽，應(yīng)使用50%的乙酸；

4、若多肽中含有大量酸性氨基酸，可用氨溶液（1-10%）或乙酸乙基*或重碳酸鹽等揮發(fā)性的堿性緩沖液溶解。pH值在層析前必須調(diào)整；

5、異丙醇和乙腈能溶解中等大小的多肽。若肽要上柱，有機(jī)溶劑的量必須很少否則將嚴(yán)重影響停留時(shí)間；

6、若多肽因含有Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳香鏈而高度疏水、或?yàn)橹行噪臅r(shí)，DMF或DMSO等膜變性劑的使用，有利于多肽的溶解：

a.高濃度模變性劑通過破壞多肽的二級結(jié)構(gòu)而助溶；

b.膜變性劑適于多肽分析液的制備，但可能會對其生物活性的研究工作造成干擾；

c.DMF是*變性劑（zui高濃度可達(dá)30%），滴加至多肽溶解；

d.反相層析法時(shí)，DMF將與洗脫液前鋒一起流出，根據(jù)入量的多少，峰值可能很高。大多數(shù)肽能在大量DMF流出后幾分鐘內(nèi)流出，若肽鏈很小，洗脫太早，多肽的量將很低。