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檸檬酸(CA)含量測定?活性計算方法

時間:2021/8/26閱讀:1301
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檸檬酸(CA)含量測定活性計算:

(1) 按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。

α-KGDH活性(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109

]÷(V樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計算:

單位的定義:每 g 組織每分鐘生成 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。

α-KGDH(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109

]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=325×ΔA÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:

單位的定義:每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。

α-KGDH 活性(nmol/min/104

 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109

]÷(500×V 樣÷V 樣總)

÷T=0.65×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4

 L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103

L / mol /cm;d:

比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.01 mL;V 樣總:加入提取液體積,0.202 mL;

T:反應(yīng)時間,2min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)

胞總數(shù),500 萬。

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

(1) 按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活性單位。

α-KGDH 活性(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109

]÷(V 樣×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計算:

單位的定義:每 g 組織每分鐘生成 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活性單位。

α-KGDH 活性(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109

]÷(W× V 樣÷V 樣總)

÷T=650×ΔA÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:

單位的定義:每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活性單位。

α-KGDH 活性(nmol/min/104

 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109

]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=1.3×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4

 L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103

L / mol /cm;d:

96 孔板光徑,0.5cm;V 樣:加入樣本體積,0.01 mL;V 樣總:加入提取液體積,0.202 mL;

T:反應(yīng)時間,2min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)

胞總數(shù),500 萬。


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