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檸檬酸(CA)含量測定活性計算:
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。
α-KGDH活性(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109
]÷(V樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr
(2) 按樣本鮮重計算:
單位的定義:每 g 組織每分鐘生成 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。
α-KGDH(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109
]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=325×ΔA÷W
(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:
單位的定義:每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。
α-KGDH 活性(nmol/min/104
cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109
]÷(500×V 樣÷V 樣總)
÷T=0.65×ΔA
V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4
L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103
L / mol /cm;d:
比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.01 mL;V 樣總:加入提取液體積,0.202 mL;
T:反應(yīng)時間,2min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)
胞總數(shù),500 萬。
b.用 96 孔板測定的計算公式如下
(1) 按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活性單位。
α-KGDH 活性(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109
]÷(V 樣×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr
(2) 按樣本鮮重計算:
單位的定義:每 g 組織每分鐘生成 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活性單位。
α-KGDH 活性(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109
]÷(W× V 樣÷V 樣總)
÷T=650×ΔA÷W
(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:
單位的定義:每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活性單位。
α-KGDH 活性(nmol/min/104
cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109
]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=1.3×ΔA
V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4
L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103
L / mol /cm;d:
96 孔板光徑,0.5cm;V 樣:加入樣本體積,0.01 mL;V 樣總:加入提取液體積,0.202 mL;
T:反應(yīng)時間,2min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)
胞總數(shù),500 萬。
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