進口原裝elisa試劑盒實驗質量如何控制

1.1 基本概念

1.1.1 質量控制（Quaility Control,Q.C）

質量控制是監(jiān)視全過程，排除誤差，防止變化，進口原裝elisa試劑盒維持標準化現狀的一個管理過程。這一過程是通過一個反饋環(huán)路進行的。

（1）確定控制的對象；

（2）規(guī)定控制對象的標準（預期值）；

（3）制定或選擇控制方法和手段；

（4）測量實際數據；

（5）比較或較對實際數據與預期值之間的差異，并說明產生這一差異的原因。超出預定誤差范圍，報警系發(fā)出信號，反饋通道中斷。

（6）采取行動，解決差異?；謴驮瓲睿ㄔ瓨藴薁顟B(tài)）的手段發(fā)揮作用。

質量控制主要采用質控圖進行。質控圖是把某一檢驗的性能數據與所計算出來的預期的"控制限"進行比較的圖。這種性能數據是在按規(guī)程正常進行時，按時間順序而抽選出來的，其目的是檢測檢驗過程中變異的"可追查"性原因。"可追逆"性的誤差原因，是指除去隨機誤差以外的其他原因。"控制限"是通過統(tǒng)計計算出來的，在后我們將詳細介紹（見1.3.室內質控程序）。

1.1.2 誤差

實驗誤差分為三種：系統(tǒng)誤差、隨機誤差和過失誤差。

系統(tǒng)誤差是指一系列測定結果與真值或靶值存在有同一傾向的誤差，有明顯的規(guī)律性，可在一定條件下重復出現，是可以通過質控預防和校正的。

隨機誤差又稱偶然誤差，是一種偶然的、未能預料到的誤差，是難以避免和校正的誤差。檢驗工作中隨機誤差的分布符合正態(tài)分布規(guī)律。

過失誤差是人為的責任誤差。通過加強實驗室管理和開展質量控制工作是可以避免的。

1.1.3 正態(tài)分布及標準差

ELISA試驗中，檢驗同一樣本達20次以上時，就會發(fā)現這組數據（指測定結果的吸光值）分布在均值兩側，大部分集中在均值附近。如果以測定值為橫坐標，以出現的頻率為縱坐標作圖，就可繪出一個呈鐘形的曲線圖。如圖5-1，鐘頂處為均值，其他值以均值為中心對稱分布，這就是正態(tài)分布。

正態(tài)曲線以下的面積稱概率，常用樣本的均數（X）和標準差（SD）來表示，其計算方法如下：

均值、標準差和概率的關系如下：

X±1SD，概率0.68　　　　X±2SD，概率0.95　　　　X±3SD，概率0.99

換言之，進口原裝elisa試劑盒當ELSIA檢測同一樣本達一定次數后所得的一組數據，其中靠近均值（X）的±1SD范圍內的數據，占該組數據的68%，在X±2SD范圍內分布的數據占總體的95%，

在X±3SD范圍內分布的數據占總體的99%。當我們要求檢驗結果在X±2SD范圍內為合格時，將有95%的數據可能合格。

1.1.4 準確度（accuracy）

是指測定結果與真值（或靶值）接近的程度。準確度不能以數字表示，往往用不準確度來衡量。測定結果與靶值的偏離程度稱為偏差，它表示該項檢驗的不準確度。

偏差=檢驗的均值-真值（或靶值）

相對偏差=偏差真值÷（或靶值）×

1.1.5 精密度（Precision）

是指對同一樣本重復測定時，每次測定結果與平均值的接近程度，即重復測定值之間的符合程度。

1.1.6 標準品

1、標準品 由WHO或相應組織標定的，用肯定的、*的、準確的物理或化學方法　　測定的定值材料。

2、生物學活性標準品根據生物學反應由WHO或相應組織標定的活性單位的材料。

3、參考標準血清 化組織根據標準化生產的法定材料?？捎糜阼b定儀器和　　鑒定方法準確性。 

5.1.7 臨床決定性水平

當某個被測物的濃度達到某一水平時，臨床醫(yī)師必須采用醫(yī)療措施。被測物的這濃度稱為臨床決定性水平。

1.2質量控制血清

質控血清是已有靶值的血清，在每次的常規(guī)檢驗中加入一份或數份，通過所得結果來了解本次檢驗的情況。質控血清檢驗的結果如能控制其誤差在一定范圍內，就說明該檢驗沒有發(fā)生不允許的誤差。如果出現超過允許誤差范圍的異常結果，提示該檢驗不合格，應尋找原因，糾正后，重檢待測標本。因此質控血清在質控工作中起重要作用。

1.2.1 臨界值質控血清

質控制血清分定值和未定值兩種。如只用一份質控血清定值，一般定在正常值與異常值交界點上，定性測定時處于弱陽性水平，稱為臨界值。乙肝標志物臨界值的制定，應按臨床要求，為臨床提供統(tǒng)一的判斷弱陽性的標準。 

臨界值質控血清可以作為試劑盒中的陽性對照品和陰性對照品以外的第三個對照品，它可以靈敏地反映出試劑盒的檢出水平，確保弱陽性反應的標本不漏檢。

1.2.2 質控血清的使用

衛(wèi)生部臨床檢驗中心制備的乙肝標志物質控血清，可以在-20℃保持半年定值不變。冰凍狀態(tài)融化使用時，應先混勻，未用完部分可在4℃保存5天。不宜反復冰融或自行分裝。開展某項檢驗的室內質控工作需要的質控血清，一般按3-6個月用量準備。自制的不定值質控血清，在一批質控血清將用完之前，需準備下一批質控血清。質控血清要求性能穩(wěn)定，較長期內效價不變，其理化性質應與病人樣本相近，這樣才能有效地起到監(jiān)測作用。

1.2.3 質控血清的制備

每個實驗室可以根據自己的條件，選用臨床中心提供的質控血清，或按以下方法自己制備本室使用的質控血清（以乙肝質控血清為例）。

（1） 收集新鮮的無溶血、無黃疸、無細菌污染的陽性血清。

（2） 56℃加熱10小時來活。

（3） 離心或過濾除去沉淀。

（4） 用10%的小牛血清或正常人血清（PBS緩沖液）將收集的血清稀釋至所需的濃度。如能用正常的人血清稀釋更好，因其成份更接近于檢測標本。

（5） 抽濾除菌。按一次使用的量分裝小安瓿，封口，20℃保存?zhèn)溆?。不可反復凍融。被檢物要求檢出的水平常被認為是質控血清應選擇的水平。如果該試驗還有其它要求，則應加所要求濃度的質控物。

（6） 標定含量。20-30次測定結果刪除>±2SD數據的均值作為靶值，并與已知定值血清對比測定。

1.3 室內質量控制程序

臨床檢驗的檢測結果，每次或每天之間不可能*。決定允許的誤差范圍，以臨床上不造成誤診與漏診為準，通過以下步驟來確定質控范圍。

1） jia條件下的測定誤差。

2） 已知值的血清在常規(guī)檢驗條件下的誤差。

3） 未知值的血清在常規(guī)檢驗條件下的誤差。

4） 臨床應用的要求。對任何一個試驗都應確定一個允許的誤差范圍，前題是滿足臨床要求。如允許誤差定得過小，在臨床上不存在任何意義，但為了符合該規(guī)定卻要花費很大人力、物力和時間。相反，如果將允許誤差定得過大，將使監(jiān)測系統(tǒng)察覺不到臨床上要求檢出的誤差，失去質控的意義。

1.3.1 jia條件下已知值質控血清變異）的測定

在本實驗室jia條件下（包括操作者、試劑、儀器等）檢測質控血清20-30次，測得

結果計算，求出該組數據的均值和標準差（SD）表示該實驗室的jia工作質量。

現舉例說明HBsAg ELISA法檢測時OCV的測定。使用的質控制血清為臨界血清，HBsAg濃度為5ng/ml。在該實驗室中選擇素質、操作熟練的技術員進行認真地專門測定，選用jia的試劑盒，檢測之前，將恒箱、加樣器等認真校正、調校正、調試，使用新的加樣吸頭等，即在jia、理想的條件下進行檢測。除質控血清外同時測定陰性對照品和陽性對照品。并作雙份測定，得出2個吸光值（A值），求出X。連續(xù)作20次，求出20個X，即X1……X20。從這20個數據中，求出OCV的X和SD。

1.3.2常規(guī)條件下已知值質控血清變異的測定。

做常規(guī)檢驗的技術人員，在常規(guī)檢驗的條件下，將質控血清放在常規(guī)檢測樣本中，進行20次檢驗，結果計算同OCV法。一般認為RCV的SD在OCV的SD兩倍范圍內可以接受。若太大應該查找原因，使其向OCV的SD值靠近。在改進實驗室條件后（例如較正加樣器，糾正洗板操作，調正溫育溫度等），重新進行RCVK的測定。如果RCVK的SD值更小，說明OCV不是jia條件下測定的，應重新再測OCV。常規(guī)條件下，RCVK肯定要比OCV大。通過質控控制各項條件，使RCVK的數據盡可能接近OCV值。RCVK的數據反映該實驗室日常工作的質量，用于作質控圖，對室內檢驗的結果進行控制，每日檢驗的結果，報告能否發(fā)出。

1.3.3常規(guī)條件下,未知值質控血清變異的測定

進口原裝elisa試劑盒有時為了避免主觀性,再作RCVU測定。

測定步驟同RCVK，但檢測的操作者不知質控血清的定值，或在操作者不知哪份是質控血汪清的條件下進行常規(guī)檢驗，以排除操作者的主觀性。在此不再舉例說明。