客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

產(chǎn)品名稱：2×SYBR Green qPCR Mix試劑盒

規(guī)格：50 次/200 次

貨號(hào)：BJP1113

分類：熒光定量PCR試劑盒

產(chǎn)品僅用于科研儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。

染料法

探針法　

可進(jìn)行相對(duì)，定量表達(dá)分析，定性分析，SNP檢測(cè)等

實(shí)驗(yàn)報(bào)告

·電泳圖   ·標(biāo)準(zhǔn)曲線 

·溶解曲線 ·擴(kuò)增曲線

·完整的實(shí)驗(yàn)過程、試劑、儀器及分析報(bào)告

儲(chǔ)存條件：

14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

探針法：

aqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān)。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對(duì)。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端，而淬滅劑則在3’ 末端。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對(duì)時(shí)，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí)，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。相對(duì)于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性。

?

檢測(cè)步驟：

一、 試劑的準(zhǔn)備

從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。

設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量

熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL

酶混合物 1 µL N×1 µL

總量 15 µL N×15µL

（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。

7.2 qPCR反應(yīng)條件

將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。

推薦循環(huán)條件:

1循環(huán) 50℃ for 2 min

預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min

PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec

60℃ for 60 sec

在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

人免疫球蛋白G4 Kit圖片TACE Antibody100 ul

人熱休克蛋白90 Kit圖片CDX2 Antibody100 ul

人視黃醇結(jié)合蛋白4 Kit品牌PLZF (D8G3G) Rabbit mAb100 ul

人尾加壓素 Kit圖片Phospho-SQSTM1/p62 (Ser403) (D8D6T) Rabbit mAb100 ul

小鼠促甲狀腺激素 Kit品牌LIN28A (A177) Antibody100 ul

小鼠促卵泡素 Kit圖片LIN28A (P22) Antibody100 ul

小鼠蛋白激酶A Kit說明書EphB1 (5F10) Mouse mAb100 ul

小鼠趨化因子5 Kit圖片GRK2 Antibody500 ul

石蠟包埋組織 RNAout30 次品牌SimpleChIP® Human TGFBR2 Promoter Primers100 ul

小鼠胃動(dòng)素（MTL）分析檢測(cè)試劑盒Phospho-ALK (Tyr1278/1282/1283) Antibody20 ul

小鼠碳酸酐酶2（CA-2）分析檢測(cè)試劑盒Phospho-ALK (Tyr1278/1282/1283) Antibody100 ul

小鼠皮質(zhì)醇（Cortisol）分析檢測(cè)試劑盒Keratin 17/19 (D32D9) XP® Rabbit mAb100 ul

小鼠流行性乙型腦炎（JE）抗體（IgG）分析檢測(cè)試劑盒Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)100 ul

小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1（sMHC-1）分析檢測(cè)試劑盒GAD2 Antibody100 ul

小鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域酪氨酸激酶2（Tie-2）分析檢測(cè)試劑盒IL-17A (D1X7L) Rabbit mAb (Mouse Specific) (PE Conjugate)100 ul

小鼠高半胱氨酸（Hcy）分析檢測(cè)試劑盒MRP3/ABCC3 (D8V8J) Rabbit mAb100 ul

小鼠雌二醇受體（ER）分析檢測(cè)試劑盒Tuberin/TSC2 (D57A9) Rabbit mAb100 ul
2×SYBR Green qPCR Mix試劑盒Fusarium solani凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 研究培養(yǎng)基: 綜合PDA：20%馬鈴薯汁1L，葡萄糖20g ，KH2PO4 3g， MgSO4.7H2O 1.5g，硫素微量，瓊脂 15g，pH 自然。生長(zhǎng)條件: 25-28℃，好氧生長(zhǎng)特性: 小型絲狀真菌。存儲(chǔ)條件: 2-8℃。液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Pasteurella│multocida分離基物: 禽霍亂青魚鷗凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 科研及血清定型培養(yǎng)基: 56生長(zhǎng)條件: 37存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法;

Aspergillus│conicus分離基物: 電導(dǎo)儀玻璃凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0015生長(zhǎng)條件: 25-28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Streptomyces│viridis凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0012生長(zhǎng)條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Lactobacillus│sp.分離基物: 稀奶油凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0006生長(zhǎng)條件: 37℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法

Bradyrhizobium│japonicum斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 與大豆共生固氮,培養(yǎng)基pH4.5生長(zhǎng)培養(yǎng)基: 0053生長(zhǎng)條件: 28-30℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法；礦物油法

Bacillus│subtilis分離基物: 土壤斜面培養(yǎng)物；凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 淀粉酶培養(yǎng)基: 2生長(zhǎng)條件: 37℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Marinobacter│sp.凍干物模式菌株: no培養(yǎng)基: 444生長(zhǎng)條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法

Pseudomonas│sp.分離基物: 其他/海邊木炭廠堆積木炭?jī)龈晌锬Ｊ骄? no應(yīng)用領(lǐng)域: 潛在有機(jī)污染物降解菌/分離自PAH富集菌群培養(yǎng)基: 471生長(zhǎng)條件: 25℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法
操作程序：

由您提供該實(shí)驗(yàn)中目的基因的相關(guān)資料（如：基因名稱、序列等信息），我們共同探討服務(wù)的可能性和技術(shù)路線；

商定服務(wù)收費(fèi)、付款方式、服務(wù)期限等，并簽定技術(shù)服務(wù)合同。

有您提供實(shí)驗(yàn)所需的足夠量的實(shí)驗(yàn)樣本（100mg組織或107個(gè)細(xì)胞），本公司不接受您提供的RNA樣本

PCR所需引物/探針（如果用探針法），可以由您自己提供，也可以委托本公司設(shè)計(jì)合成（費(fèi)用另計(jì)）。如果由您自己提供，必須是PAGE純化的高質(zhì)量的干粉，本公司不接受已溶解的引物/探針。

我們進(jìn)行RNA抽提、RNA定量、反轉(zhuǎn)錄、Real-time PCR擴(kuò)增、數(shù)據(jù)分析。

產(chǎn)品僅用于科研提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告，包括實(shí)驗(yàn)過程、所用儀器試劑、擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線和相關(guān)分析數(shù)據(jù)等。