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產(chǎn)地	進(jìn)口	加工定制	是
適用領(lǐng)域	科研

試劑配制:
1、小鼠乙酰膽堿酯酶Elisa Kit圖片酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔或者48孔）。
2、標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3、樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格
小鼠乙酰膽堿酯酶Elisa Kit圖片	Mouse acetylcholine esterase ,AchE ELISA Kit	48T/96T

小鼠乙酰膽堿酯酶（AchE）Elisa KitMouse acetylcholine esterase ,AchE ELISA Kit
小鼠乙酰膽堿酯酶Elisa Kit圖片【實驗用途】乙酰膽堿酯酶 acetylcholine esterase AchE（也稱真性膽堿酯酶）：活性高,選擇性水解Ach的必需酶，能使乙酰膽堿（ACh）水解成膽堿和乙酸。乙酰膽堿酯酶 acetylcholine esterase EC3.1.1.7。膽堿酯酶中的I型（即true choli-neesterase）廢物特異性高，因為只分解以乙酰膽堿為中心的狹窄范圍的底物，故特此這樣稱呼。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（ELISA）。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體，經(jīng)生物素（biotin）標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。

操作步驟：
1）小鼠乙酰膽堿酯酶Elisa Kit圖片運用前，將所有試劑充沛混勻。不要使液體發(fā)生很多的泡沫，防止加樣時參加很多的氣泡，發(fā)生加樣上的差錯。
2）依據(jù)待測樣品數(shù)量加上規(guī)范品的數(shù)量決議所需的板條數(shù)。每個規(guī)范品和空白孔主張做復(fù)孔。每個樣品依據(jù)自個的數(shù)量來定，能運用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后參加50ul于反響孔內(nèi)。
3）參加稀釋好后的規(guī)范品50ul于反響孔、參加待測樣品50ul于反響孔內(nèi)。當(dāng)即參加50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，悄悄振動混勻，37℃溫育1小時。
4）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗刷液，振動30秒，甩去洗刷液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。假如用洗板機洗刷，洗刷次數(shù)添加一次。
5）每孔參加80ul的親和鏈酶素-HRP，悄悄振動混勻，37℃溫育30分鐘。
6）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗刷液，振動30秒，甩去洗刷液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。假如用洗板機洗刷，洗刷次數(shù)添加一次。
7）每孔參加底物A、B各50ul，悄悄振動混勻，37℃溫育10分鐘。防止光照。
8）取出酶標(biāo)板，敏捷參加50ul停止液，參加停止液后應(yīng)當(dāng)即測定成果。
9）在450nm波利益測定各孔的OD值。
注意事項：
1加樣：
①小鼠乙酰膽堿酯酶Elisa Kit圖片實驗樣本過多時，可分批次操作，以減少實驗時間延長造成的誤差；
②加酶試劑后，用吸水紙吸干孔外試劑；
③作定量試驗時，使用加樣器加注試劑，并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性，此外，要做到一份樣本一個移液頭，防止交叉污染。
2.溫育：
①如有兩種溫度，盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時間的條件；
②用1個小溫度計放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察；
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會造成“邊緣效應(yīng)”，因此盡量采用水浴；
3.洗板：
①手工洗板時，拍板時要垂直，避免交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復(fù)合物脫離；
②洗板機洗板時應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢，若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出；
③為了洗滌效果好，實驗室可采用機器與人工洗滌相結(jié)合的方法，在機器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次，或適當(dāng)增加洗板的次數(shù)；
4.顯色：
ELISA試劑盒中，如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液；如以鄰苯二胺(OPD)為底物，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑，要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光，但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定：
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成，定性測定用肉眼判讀試驗結(jié)果時，反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm；定量測定時用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果，酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽光或強光照射下，需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測試。
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