免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過(guò)0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
詳細(xì)介紹：

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抗體的制備過(guò)程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過(guò)分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見(jiàn)偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進(jìn)行保存?？贵w一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià)，而真空干燥保存時(shí)間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見(jiàn)的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)?？贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補(bǔ)體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)去激活補(bǔ)體系統(tǒng)、激發(fā)補(bǔ)體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過(guò)胎盤及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過(guò)胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動(dòng)免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過(guò)消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對(duì)理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上?？捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
李氏菌增菌肉湯（LB1，LB2）基礎(chǔ)小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基肺大動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞HCV-NS4a  丙型肝炎病毒-NS4a（抗原）

七葉苷培養(yǎng)基成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞HEV  戊型肝炎病毒（抗原）

半固體動(dòng)力培養(yǎng)基成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HGV(Hepatitis G vivus)  庚型肝炎病毒（抗原）

牛津瓊脂（OXA）基礎(chǔ)成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基肺大靜脈平滑肌細(xì)胞HisX6  聚組氨酸標(biāo)簽蛋白

PALCAM培養(yǎng)基基礎(chǔ)成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基-2肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞HIV gp120  艾滋病病毒（抗原）

Fraser肉湯基礎(chǔ)扁桃體上皮細(xì)胞培養(yǎng)基肺泡上皮細(xì)胞HSP-60( Heat shock protein-60)  熱休克蛋白-60（抗原）

FB1/Half Fraser配套試劑(吖啶黃素、萘啶酮酸、檸檬酸鐵銨、氯化鋰)口腔角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基氣管上皮細(xì)胞HSP-70 peptide  熱休克蛋白-70（多肽抗原）

Fraser配套試劑(吖啶黃素、萘啶酮酸、檸檬酸鐵銨、氯化鋰)肺泡上皮細(xì)胞培養(yǎng)基支氣管上皮細(xì)胞alpha Adaptin/AP1  銜接蛋白α抗原

GR /FITC  熒光素標(biāo)記糖皮質(zhì)激素受體IgG卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白721,12-二溴十二烷Rat PC4 (Positive Cofactor 4) 檢測(cè)試劑盒

GPNMB/Osteoactivin/FITC  熒光素標(biāo)記GPNMBIgG卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白73三氟甲磺酸鋰Rat PA/PLB (Pre-Albumin) 檢測(cè)試劑盒

Phospho-Glucocorticoid Receptor (Ser211) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化糖皮質(zhì)激素受體IgG卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白74B三氟甲磺酸鋰Rat FXI (Coagulation Factor XI) 檢測(cè)試劑盒

GRB2/ASH /FITC  熒光素標(biāo)記生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白2IgG19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框25(S)-(+)-3-氨基哌啶Rat PRO-ANP (Pro Atrial Natriuretic Peptide) 檢測(cè)試劑盒

GPR109A/HM74A/FITC  熒光素標(biāo)記G蛋白偶聯(lián)受體109AIgG19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框42(S)-(+)-3-氨基哌啶Rat PCT (Procalcitonin) 檢測(cè)試劑盒

GRB10/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白10IgG19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框44(S)-(+)-3-氨基哌啶Rat PINP (Procollagen I N-Terminal Peptide) 檢測(cè)試劑盒

Phospho-GRB10 (Tyr67) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白10IgG19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框48(R)-(-)-3-氨基哌啶 Rat PⅢNT (Procollagen Ⅲ N-Terminal Peptide)檢測(cè)試劑盒

GrB(Granzyme B)(AA 18-29)/FITC  熒光素標(biāo)記顆粒酶BIgG19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框50(R)-(-)-3-氨基哌啶 Rat PIIINP (N-Terminal Procollagen Ⅲ Propeptide) 檢測(cè)試劑盒
α-s1酪蛋白抗體總狀共頭霉Mouse NT-4 (Neurotrophin 4)  Kit

Xanthomonas gardneriMouse NAP3 (Neutrophil Activating Protein 3)  Kit  

類干酪乳桿類干酪亞種Mouse NAP-2 (Neutrophil Activating Protein-2)  Kit

蠟狀芽孢桿Mouse NGAL (Neutrophil Gatinase Associated Lipocalin)  Kit

煙曲霉Mouse (Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate Oxidase 1)  Kit  

禽勞斯肉瘤病毒Mouse NOX4 (Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate Oxidase 4)  Kit  

產(chǎn)氣莢膜梭       毒素C型Mouse NADPH (Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate)  Kit

木霉Mouse NT-proBNP (N-terminal pro-Brain Natriuretic Peptide)  Kit