當(dāng)前位置:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司>>RNA/DNA提取>>核酸電泳及回收>> 堿性膠電泳液 ,10×250mL品牌
產(chǎn)地 | 進(jìn)口 | 加工定制 | 否 |
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適用領(lǐng)域 | 科研 |
問:常用的DNA 濃度及純度檢測方法有哪些?
堿性膠電泳液 ,10×250mL品牌稱答:回收得到的DNA段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測濃度與純度。瓊脂糖凝膠電泳通過對比定量的Marker 來定量濃度;紫外分光檢測OD260/280 比值,OD260/280 比值在1.7-1.9 之間說明所得 DNA 純度較好,如果洗脫時不使用溶液Eluent而使用去離子水,比值會偏低,因?yàn)閜H 值和離子存在會影響光吸收值,但不表示純度低。
問:長片段回收時應(yīng)注意哪些問題?
答:堿性膠電泳液 ,10×250mL品牌當(dāng)DNA 段長度較長(5 kb 以上)時,回收效率會有所下降,這是DNA 切膠回收時的常見現(xiàn)象。此時建議按以下方法解決問題:
1 適當(dāng)增加待回收DNA 樣品的點(diǎn)樣量;
2 由于長段DNA 不易從樹脂上洗脫下來,建議洗脫兩次,可以提高洗脫效率;
3 減少操作過程中對長段DNA 的物理損傷,如混合振蕩操作不要過于劇烈,切膠時不要將DNA 長時間暴露在紫外等下。
堿性膠電泳液 ,10×250mL品牌的詳細(xì)介紹:
DNA提取流程圖:
公司堿性膠電泳液 ,10×250mL品牌的RNA/DNA提取目錄有下面10個系列,5000余種產(chǎn)品:點(diǎn)擊了解更核酸電泳及回收。
1、RNA純化系列產(chǎn)品
2、DNA純化系列產(chǎn)品
3、電泳及回收系列產(chǎn)品
4、探針標(biāo)記及檢測系列產(chǎn)品
5、核酸擴(kuò)增系列產(chǎn)品
6、克隆表達(dá)系列產(chǎn)品
7、基因組研究系列產(chǎn)品
8、蛋白質(zhì)研究系列產(chǎn)品
9、細(xì)胞生物學(xué)研究系列產(chǎn)品
10、即用型溶液、質(zhì)粒庫、菌種庫等等
實(shí)驗(yàn)步驟:
(1)堿性膠電泳液 ,10×250mL品牌實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::(25:24:1)抽提兩次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測RNA的質(zhì)量
注意事項(xiàng):
● 堿性膠電泳液 ,10×250mL品牌溶液PE *次使用前請按瓶上標(biāo)簽加入4 倍體積的無水乙醇,即15 ml 溶液PE 中加入60 ml 無水乙醇,20 ml 溶液PE 中加入80 ml 無水乙醇,使用后立即蓋緊蓋子。
● 本產(chǎn)品對電泳使用的Agarose 種類沒有嚴(yán)格限制,可以使用普通Agarose 。為了保證回收DNA 的質(zhì)量和DNA 回收效率,希望使用高純度的Agarose ,但沒有必要一定要使用低熔點(diǎn)的Agarose 等。
● 電泳時請使用新鮮配制的TAE 電泳緩沖液,以免影響電泳及回收效果。
● 請適當(dāng)延長電泳時間,在條帶分離清晰后進(jìn)行切膠回收,以免回收到多余雜帶。
● 為提高DNA 回收收率,切膠時應(yīng)盡量除去多余的膠塊。
● 本試劑盒純化柱的DNA 吸附能力強(qiáng)。但如果DNA 濃度小,或DNA 初始量少,回收率將會偏低。
● 溶液Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA段可直接用于各種酶促反應(yīng)等,不會影響后續(xù)試驗(yàn)。
● 為了保證回收效率,請不要使用未調(diào)整pH 值的超純水洗脫目的段。
● 請嚴(yán)格按照操作步驟操作。
油酸酰胺(>65.0%(GC)) Oleamide 301-02-0 質(zhì)量規(guī)格:>65.0%(GC)
油酸鈉(>98%,BR ) Sodium oleate 143-19-1 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
油酸鉀(>96%,BR) Potassium oleate 143-18-0 質(zhì)量規(guī)格:>96%,BR
油酸甲酯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.0%(GC)) Methyl oleate 112-62-9 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.0%(GC)
油酸甲酯(Standard for GC,≥99%(GC)) Methyl oleate 112-62-9 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99%(GC)
油酸膽固醇酯(>85.0%(GC)) Cholesterol Oleate 303-43-5 質(zhì)量規(guī)格:>85.0%(GC)
油酸(標(biāo)準(zhǔn)品) Oleic acid 112-80-1 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC)
油紅O/溶劑紅27/蘇丹紅5B Oil red O/Solvent Red 27 1320-06-5 質(zhì)量規(guī)格:BS
優(yōu)級真空泵油(Viscosity Grade 68) Vacuum pump oil 64741-88-4 質(zhì)量規(guī)格:Viscosity Grade 68
優(yōu)級真空泵油(Viscosity Grade 46) Vacuum pump oil 64741-88-4 質(zhì)量規(guī)格:Viscosity Grade 46
優(yōu)級真空泵油(Viscosity Grade 150) Vacuum pump oil 64741-88-4 質(zhì)量規(guī)格:Viscosity Grade 150
優(yōu)級真空泵油(Viscosity Grade 100) Vacuum pump oil 64741-88-4 質(zhì)量規(guī)格:Viscosity Grade 100
硬脂酰胺(>90.0%(GC)) Stearamide 124-26-5 質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(GC)
硬脂酸鋅 Zinc distearate 557-05-1 質(zhì)量規(guī)格:BR
硬脂酸鉛 Lead (II) stearate 1072-35-1 質(zhì)量規(guī)格:BR
硬脂酸鈉(>95%,BR) Sodium stearate 822-16-2 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
硬脂酸鎂 Magnesium stearate 557-04-0 質(zhì)量規(guī)格:BR
硬脂酸鋁 Aluminum stearate 637-12-7 質(zhì)量規(guī)格:AR
硬脂酸鋰(>98%,BR) Lithium stearate 944493 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
堿性膠電泳液 ,10×250mL品牌Lecithin規(guī)格:HPLC>98%,BR
Lead(II)Phthalocyanine規(guī)格:>95.0%(T)
Lead(II)carbonatebasic規(guī)格:>99%,BR
Leadstandard規(guī)格:100µg/mL,,基體:1%HNO3
Leadpowder規(guī)格:>99%,BC
Leadgranules規(guī)格:>99%,5N
Lead(IV)acetate規(guī)格:>95%,BC
Lead(II)sulfate規(guī)格:>99%,BC
Lead(II)stearate規(guī)格:BR
Lead(II)iodide規(guī)格:>98%,BR
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