免疫熒光技術(shù)的實驗步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強度。
詳細介紹：

?
抗體的制備過程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析，具有高效，特異性強，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價，而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
?
抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)。抗體是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補體結(jié)合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
UBQLNL aibody53 kDa, Observed 70 kDa Q8IYU4Human, Mouse

UBR2 aibody66 kDa Q8IWV8Human, Mouse

UBR7 aibody48 kDa Q8N806Human, Mouse, Rat

UBTD2 aibody50 kDa Q8WUN7Human, Mouse, Rat

UBXD1 aibody50 kDa Q9BZV1Human, Mouse, Rat

UBXD2 aibody60 kDa Q92575Human, Mouse, Rat

UBXN1 aibody35 kDa, Observed 45 kDa Q04323Human, Mouse, Rat

突變的黑色素瘤相關(guān)抗原1抗體別 名 EXPAND1; FLJ14868; FLJ22283; HSPC211; Manoma associated aigen (mutated) 1; Manoma ubiquitous mutated protein; MGC131891; MGC163315; MUM 1; MUM-1; MUM1; MUM1_HUMAN; Mutated manoma associated aigen 1; Mutated manoma-associated aigen 1; Protein expandere; PWWP domain coaining protein MUM1; PWWP domain-coaining protein MUM1.

黑色素瘤相關(guān)抗原10抗體別 名 Cancer/testis aigen 1.10; CT1.10; MAGE 10 aigen; MAGE10; Manoma aigen family A 10; Manoma associated aigen 10; MAGAA_HUMAN.

肌球蛋白XVIIIb抗體別 名 MYO18B; myosin 18B; Unconveional myosin-XVIIIb;
磷酸化EGF應(yīng)答因子1抗體Cordyceps│militaris (L.) Link提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 25定期移植法

Bacillus│thuringiensis分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no生物殺蟲劑培養(yǎng)基: 2生長條件: 30℃液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Bacillus│thuringiensis分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物；凍干物安全等級: 1模式株: no生物殺蟲劑培養(yǎng)基: 2生長條件: 37℃液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Burkholderia│gladioli提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

芽孢桿種屬: Bacillus atrophaeus提供形式: 凍干管，斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no滅指示。培養(yǎng)基: 蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿時加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。傳代方法: ①凍干管：75%酒精擦拭管壁，后用砂輪在凍干管壁劃兩圈，掰斷，用200μL無水或培養(yǎng)基充分溶解，平板涂布，活化培養(yǎng)。

②斜面：試管口用75%酒精擦拭后，火焰灼燒，后用無接種鏟切塊，挑取接入平板或斜面，培養(yǎng)。生長條件: 30℃，好氧2-8℃冷藏，凍干管10年以上，斜面1-3個月。

Streptomyces│griseoplanus Backus et al.分離基物: 植物根際提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 12生長條件: 28-30定期移植法

Cytospora│salicis (Corda) Rabenh.分離基物: 枝桿提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 26定期移植法

傷寒沙門氏種屬: Salmonella│typhi提供形式: 凍干物安全等級: 2模式株: no噬體分型用 Vi 46　　　9,12,Vi　d　-培養(yǎng)基: CM0051生長條件: 37℃真空冷凍干燥法

釀酒酵母種屬: Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0013生長條件: 25-28℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法