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免疫熒光技術的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產品名稱 | 21號染色體開放閱讀框128抗體 |
英文名稱 | C21orf128 |
貨號 | BJ-K7913 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產品僅用于科研保存前需經除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習性:
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應抗原發(fā)生特異性結合,在體內導致生理或病理效應;在體外產生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應??贵w是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結合不同種的細胞,產生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質,也具有刺激機體產生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質凝固變性的物質,均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經透析法將其純化。
MR-VP培養(yǎng)基人表皮角質細胞-新生原代上皮細胞培養(yǎng)特制添加劑AGEs control article(advanced glycosylation end products control article) 晚期糖基化終末產物蛋白對照品
察氏培養(yǎng)基人表皮角質細胞-成人原代內皮細胞培養(yǎng)特制添加劑ET-1(Endothelin-1) 內皮素-1(蛋白多肽 活性蛋白)
結晶紫中性紅膽鹽瓊脂VRBA人表皮角質細胞-胎兒原代平滑肌細胞培養(yǎng)特制添加劑GRGDS peptide 粘附多肽GRGDS
結晶紫中性紅膽鹽瓊脂人表皮黑色素細胞-淺色素原代成纖維細胞培養(yǎng)特制添加劑PACAP(1-38 Peptide) 腺苷酸環(huán)化酶激活肽 1-38(全蛋白)
產毒培養(yǎng)基人表皮黑色素細胞-中色素原代心肌細胞培養(yǎng)特制添加劑MBP(Myelin Basic Protein, MBP 68-86) 髓鞘堿性蛋白(多肽抗原)
西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂人表皮黑色素細胞-深色素原代表皮角化細胞培養(yǎng)特制添加劑Bursin 囊素三肽/三肽囊素/雞法氏囊三肽
腸道菌計數瓊脂(VRBDA)人表皮黑色素細胞-成人原代系膜細胞培養(yǎng)特制添加劑NPY ( Neuropeptide Y)1-36 神經肽 Y(1-36多肽)
菌種保存培養(yǎng)基人表皮黑色素細胞-胎兒原代肝實質細胞培養(yǎng)特制添加劑Leupeptin 亮抑酶肽
EGF(mouse)/FITC 熒光素標記表皮生長因子(小鼠)IgG甘氨酸結合蛋白甲基烯酸十八烷基酯Rat HPX (Hemopexin) 檢測試劑盒
HB-EGF/DTSF/FITC 熒光素標記肝素結合性表皮生長因子IgG多巴胺D1受體相互作用蛋白雙酚芴Rat HSPG (Heparan Sulphate Proteoglycan) 檢測試劑盒
EGF/FITC 熒光素標記表皮生長因子(大鼠)IgGCapicua蛋白雙酚芴Rat HPA (Heparanase) 檢測試劑盒
EP3/FITC 熒光素標記前列腺素E受體3IgG碳酸酐酶6雙酚芴Rat HBEGF (Heparin Binding Epidermal Growth Factor Like Growth Factor) 檢測試劑盒
E.coli O6 (Escherichia coli O6)/HRP 辣根過氧化物酶標記抗大腸埃希桿菌O6IgG間隙連接蛋白29雙酚芴Rat HC II (Heparin Cofactor II) 檢測試劑盒
E.coli DH-5 Alpha/FITC 熒光素標記抗DH5α大腸桿菌菌體蛋白IgG間隙連接蛋白29異吲哚啉鹽酸鹽Rat LIPC (Lipase, Hepatic) 檢測試劑盒
E.coli DH-5 Alpha /HRP 辣根過氧化物酶標記抗DH5α大腸桿菌菌體蛋白IgG細胞表面趨化因子受體7異吲哚啉鹽酸鹽Rat HGF (Hepatocyte Growth Factor) 檢測試劑盒
E.coli O139/HRP 辣根過氧化物酶標記抗志賀毒素大腸桿菌O139IgG神經母細胞瘤源性分泌蛋白異吲哚啉鹽酸鹽Rat HNF1a (Hepatocyte Nuclear Factor 1 Alpha) 檢測試劑盒
21號染色體開放閱讀框128抗體紅緣層孔Mouse GAL2 (Galectin 2) Kit 小鼠腎小球旁細胞
平田頭菇10-4Mouse GAL3 (Galectin 3) Kit 小鼠胰腺癌細胞(B類)
大腸埃希Mouse GAL4 (Galectin 4) Kit 人精原瘤細胞
嗜酸乳桿Mouse GAL6 (Galectin 6) Kit 小鼠心肌微血管內皮細胞
高盧蜜環(huán)Mouse GAL7 (Galectin 7) Kit 人紅白血病細胞
黑根霉Mouse GAL8 (Galectin 8) Kit 人惡性多發(fā)性畸胎瘤細胞
聚生殼Mouse GAL9 (Galectin 9) Kit 牛肺血管內皮細胞
枯草芽孢桿枯草亞種Mouse GAL12 (Galectin 12) Kit 人牙周膜成纖維細胞
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