免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過(guò)0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
詳細(xì)介紹：

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抗體的制備過(guò)程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過(guò)分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見(jiàn)偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進(jìn)行保存?？贵w一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià)，而真空干燥保存時(shí)間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見(jiàn)的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)。抗體是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補(bǔ)體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)去激活補(bǔ)體系統(tǒng)、激發(fā)補(bǔ)體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類(lèi)別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過(guò)胎盤(pán)及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過(guò)胎盤(pán)進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動(dòng)免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過(guò)消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對(duì)理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類(lèi)沉淀。在生產(chǎn)上?？捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
MR-VP培養(yǎng)基人表皮角質(zhì)細(xì)胞-新生原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑AGEs control article(advanced glycosylation end products control article)  晚期糖基化終末產(chǎn)物蛋白對(duì)照品

察氏培養(yǎng)基人表皮角質(zhì)細(xì)胞-成人原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑ET-1(Endothelin-1)  內(nèi)皮素-1（蛋白多肽 活性蛋白）

結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂VRBA人表皮角質(zhì)細(xì)胞-胎兒原代平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑GRGDS peptide  粘附多肽GRGDS

結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂人表皮黑色素細(xì)胞-淺色素原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑PACAP(1-38 Peptide)  腺苷酸環(huán)化酶激活肽 1-38（全蛋白）

產(chǎn)毒培養(yǎng)基人表皮黑色素細(xì)胞-中色素原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑MBP(Myelin Basic Protein, MBP 68-86)  髓鞘堿性蛋白(多肽抗原)

西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂人表皮黑色素細(xì)胞-深色素原代表皮角化細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑Bursin  囊素三肽/三肽囊素/雞法氏囊三肽

腸道菌計(jì)數(shù)瓊脂（VRBDA)人表皮黑色素細(xì)胞-成人原代系膜細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑NPY ( Neuropeptide Y)1-36  神經(jīng)肽 Y（1-36多肽）

菌種保存培養(yǎng)基人表皮黑色素細(xì)胞-胎兒原代肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑Leupeptin   亮抑酶肽

EGF(mouse)/FITC  熒光素標(biāo)記表皮生長(zhǎng)因子(小鼠)IgG甘氨酸結(jié)合蛋白甲基烯酸十八烷基酯Rat HPX (Hemopexin) 檢測(cè)試劑盒

HB-EGF/DTSF/FITC  熒光素標(biāo)記肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子IgG多巴胺D1受體相互作用蛋白雙酚芴Rat HSPG (Heparan Sulphate Proteoglycan) 檢測(cè)試劑盒  

EGF/FITC  熒光素標(biāo)記表皮生長(zhǎng)因子(大鼠)IgGCapicua蛋白雙酚芴Rat HPA (Heparanase) 檢測(cè)試劑盒

EP3/FITC  熒光素標(biāo)記前列腺素E受體3IgG碳酸酐酶6雙酚芴Rat HBEGF (Heparin Binding Epidermal Growth Factor Like Growth Factor) 檢測(cè)試劑盒

E.coli O6 (Escherichia coli O6)/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗大腸埃希桿菌O6IgG間隙連接蛋白29雙酚芴Rat HC II (Heparin Cofactor II) 檢測(cè)試劑盒

E.coli DH-5 Alpha/FITC  熒光素標(biāo)記抗DH5α大腸桿菌菌體蛋白IgG間隙連接蛋白29異吲哚啉鹽酸鹽Rat LIPC (Lipase, Hepatic) 檢測(cè)試劑盒

E.coli DH-5 Alpha /HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗DH5α大腸桿菌菌體蛋白IgG細(xì)胞表面趨化因子受體7異吲哚啉鹽酸鹽Rat HGF (Hepatocyte Growth Factor) 檢測(cè)試劑盒

E.coli O139/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗志賀毒素大腸桿菌O139IgG神經(jīng)母細(xì)胞瘤源性分泌蛋白異吲哚啉鹽酸鹽Rat HNF1a (Hepatocyte Nuclear Factor 1 Alpha) 檢測(cè)試劑盒
21號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框128抗體紅緣層孔Mouse GAL2 (Galectin 2)  Kit   小鼠腎小球旁細(xì)胞

平田頭菇10-4Mouse GAL3 (Galectin 3)  Kit   小鼠胰腺癌細(xì)胞（B類(lèi)）

大腸埃希Mouse GAL4 (Galectin 4)  Kit  人精原瘤細(xì)胞

嗜酸乳桿Mouse GAL6 (Galectin 6)  Kit    小鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞

高盧蜜環(huán)Mouse GAL7 (Galectin 7)  Kit  人紅白血病細(xì)胞

黑根霉Mouse GAL8 (Galectin 8)  Kit   人惡性多發(fā)性畸胎瘤細(xì)胞

聚生殼Mouse GAL9 (Galectin 9)  Kit  牛肺血管內(nèi)皮細(xì)胞

枯草芽孢桿枯草亞種Mouse GAL12 (Galectin 12)  Kit   人牙周膜成纖維細(xì)胞