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抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
6號染色體開放閱讀框62抗體 | C6orf62 | BJ-K7914 |
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單抗的制備過程:
1.動物免疫:注射特定抗原蛋白
2.分離脾淋巴細胞:與培養(yǎng)好的骨髓瘤細胞混合,人工誘導細胞融合。
3.細胞融合:淋巴細胞雜交瘤的制備
4.雜交瘤細胞的篩選:HAT選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞。(含次黃嘌呤(H)、氨基喋呤(A)及胸腺嘧啶核苷(T)的一種培養(yǎng)基,其中三種成分與細胞DNA合成有關,骨髓瘤細胞遺傳缺陷型,不能利用,被淘汰)
5.培養(yǎng)雜交瘤細胞:體外培養(yǎng)雜交瘤細胞,從培養(yǎng)液中分離提取單克隆抗體?;蛘撸瑢㈦s交瘤細胞移植到小鼠腹腔內,從小鼠腹水中分離提取單克隆抗體。
6.單克隆抗體的制備和凍存、純化
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實驗原理 :
(1)特異性結合抗原:抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細胞,通常需要補體或吞噬細胞等共同發(fā)揮效應以清除病原微生物或導致病理損傷。然而,抗體可通過與病毒或毒素的特異性結合,直接發(fā)揮中和病毒的作用。
(2)活補體:IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經(jīng)典途徑激活補體,凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補體。
(3)結合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結合不同種的細胞,參與免疫應答。
(4)產(chǎn)品僅用于科研可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質,也具有刺機體產(chǎn)生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質凝固變性的物質,均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
單克隆抗體:
1.概念:由單個B淋巴細胞進行無性繁殖形成的細胞系所產(chǎn)生出的化學性質單一、特異性強的抗體。
2.特點:化學性質單一,特異性強,靈敏度高。
3.單克隆抗體的應用:
(1)診斷疾病:診斷病毒引起的疾病和用癌細胞抗原制備的單克隆抗體定位診斷。
(2)藥物導向治療:運用藥物與單克隆抗體連接在一起制成
(3)分離和純化抗原分子。
改良羅氏培養(yǎng)基基礎人真皮成纖維母細胞-胎兒原代腎實質細胞培養(yǎng)特制添加劑GRP( Gastrin Releasing Peptide ) 促胃泌素釋放肽(抗原)
酸性L-J培養(yǎng)基基礎人真皮成纖維母細胞-新生原代骨細胞培養(yǎng)特制添加劑BSA(標準) 牛血清白蛋白(標準)
堿性L-J培養(yǎng)基基礎人真皮成纖維母細胞-成人原代滑膜皮細胞培養(yǎng)特制添加劑MBP (Myelin Basic Protein, Rat)peptide 髓鞘堿性蛋白(多肽)大鼠
乳糖蛋白胨培養(yǎng)液人毛細胞原代骨骼肌細胞培養(yǎng)特制添加劑MOG35-55 (myelin oligo-dendrocyte glycoprotein-MOG) 髓鞘少樹突膠質細胞糖蛋白(活性多肽)
乳糖蛋白胨培養(yǎng)液人生發(fā)基質細胞原代神經(jīng)元細胞培養(yǎng)特制添加劑IGF-I( Insulin-like Growth Factor-I ) 胰島素樣生長因子-I(抗原)
馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)人外根鞘細胞原代神經(jīng)膠質細胞培養(yǎng)特制添加劑VIP (Vasoactive Intestinal peptide) 血管活性腸肽
馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(不含氯霉素)人內根鞘細胞原代單核細胞培養(yǎng)特制添加劑IGF-II( Insulin-like Growth Factor-II ) 胰島素樣生長因子-II(抗原)
Cary-Blair氏運送培養(yǎng)基人角質細胞原代軟骨細胞培養(yǎng)特制添加劑TP-5(Thymopentin) 胸腺五肽
E.coli O157/HRP 辣根過氧化物酶標記抗大腸埃希氏菌O157IgG染色質修飾蛋白2B2,5-呋喃二羧酸Rat HNF4a (Hepatocyte Nuclear Factor 4 Alpha) 檢測試劑盒
EPEC/E.coli /HRP 辣根過氧化物酶標記抗腸致病性大腸桿菌IgG細胞骨架相關蛋白1/微管蛋白折疊輔助因子B2,5-呋喃二羧酸Rat HDGF (Hepatoma Derived Growth Factor) 檢測試劑盒
EPEC/E.coli/HRP 辣根過氧化物酶標記抗普通大腸埃希菌菌體蛋白IgG神經(jīng)細胞蠟樣質脂褐質沉積病蛋白CLN52,5-呋喃二羧酸Rat Hepc (Hepcidin) 檢測試劑盒
E.coli/EPEC/FITC 熒光素標記抗普通大腸埃希菌菌體蛋白IgG神經(jīng)細胞蠟樣質脂褐質沉積病蛋白CLN81-甲基-3-吲哚酸Rat HNRPA1 (Heterogeneous Nuclear Ribonucleoprotein A1) 檢測試劑盒
E.coli O6 (Escherichia coli O6)/FITC 熒光素標記大腸埃希桿菌O6IgGcereblon蛋白1-甲基-3-吲哚酸Rat HK1 (Hexokinase 1) 檢測試劑盒
E.coli O139/FITC 熒光素標記抗志賀毒素大腸桿菌O139IgG補體C1q和腫瘤壞死因子相關蛋白5苯二乙酯Rat HK (Hexokinase) 檢測試劑盒
E.coli O157/FITC 熒光素標記抗大腸埃希氏菌O157IgG胞苷尿苷鳥苷結合蛋白1苯二乙酯Rat HDL (High Density Lipoprotein) 檢測試劑盒
EPEC/E.coli /FITC 熒光素標記兔抗腸致病性大腸桿菌IgG原腸胚雙向形成相關蛋白苯二乙酯Rat HMGB-1 (High Mobility Group Protein B1) 檢測試劑盒
6號染色體開放閱讀框62抗體沃氏富鹽Mouse gGT1 (Gamma Glutamyltransferase 1) Kit 大鼠血管內皮細胞
多主葡萄殼Mouse GJb1 (Gap Junction Protein Beta 1) Kit 小鼠胰島素瘤胰島a細胞
變異鏈霉Mouse GIP (Gastric Inhibitory Polypeptide) Kit 大鼠主動脈平滑肌細胞
明尼蘇達被毛孢Mouse GT-34 (Gastrin 34) Kit 雞巨噬細胞
雙孢蘑菇Mouse CA199 (Gastrointestinalcancer Marker-CA199) Kit人結膜上皮細胞
白地霉Mouse GKN2 (Gastrokine 2) Kit 牛主動脈內皮細胞
郝氏鏈霉Mouse GATA1 (GATA Binding Protein 1) Kit 小鼠血管內皮瘤細胞
嗜肉考克氏Mouse GATA2 (GATA Binding Protein 2) Kit 正常人表皮角質形成細胞
多克隆抗體定制:
當機體受到抗原刺激后, 產(chǎn)生免疫學反應,由機體的漿細胞合成并分泌的與抗原有特異性結合能力的一組球蛋白,這就是免疫球蛋白,這種與抗原有特異性結合能力的免疫球蛋白就是抗體。 抗體的特異性取決于抗原分子的決定簇,各抗原分子具有許多抗原決定簇。因此,由它免疫動物所產(chǎn)生的抗血清實際上是多種抗體的混合物,稱為多克隆抗體。由于具有可識別多個表位、可引起凝集反應、沉淀反應等優(yōu)點,產(chǎn)品僅用于科研被廣泛應用于免疫學診斷領域,。
(1)IgG :血清中含量,因此是重要的抗感染分子,包括抗菌、抗病毒、抗毒素等。IgG 還能激活補體,結合并增強巨噬細胞的吞噬功能(調理作用和 ADCC 效應),穿過胎盤,保護胎兒及新生嬰兒免受感染。
(2)IgA :分單體和雙體兩種。前者存在血清中,后者存在于黏膜表面及分泌液中,是黏膜局部抗感染的重要因素。
(3)IgM :是分子量大,體內受感染后早產(chǎn)生的抗體,具有很強的激活補體和調理作用,因此是重要的抗感染因子,且常用于診斷早期感染。
(4)IgD :主要存在于成熟 B 細胞表面,是 B 細胞識別抗原的受體。
(5)IgE :血清中含量少的抗體,某些過敏性體質的人血清中可檢測到,參與介導 I 型超敏反應和抗寄生蟲感染。
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