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免疫熒光技術的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產品名稱 | 細胞分裂核仁蛋白1抗體 |
英文名稱 | DENTT |
貨號 | BJ-K8324 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習性:
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應抗原發(fā)生特異性結合,在體內導致生理或病理效應;在體外產生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應??贵w是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結合不同種的細胞,產生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質,也具有刺激機體產生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質凝固變性的物質,均能破壞抗體的作用。抗體可被中性鹽類沉淀。在生產上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
Phospho-Beta-Catenin (Ser33/37) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白格列喹酮2,5-二Human IGFBP-3 (Insulin Like Growth Factor Binding Protein 3) 檢測試劑盒
Phospho-Beta-Catenin (Ser45) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白格列吡BOC-D-烯基甘氨酸Human IL-1α (Ierleukin 1 Alpha) 檢測試劑盒
Phospho-Beta-Catenin (Ser552) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白4-[2-(5-甲基吡-2-甲酰氨基)乙基]磺酰胺BOC-D-烯基甘氨酸Human IL-1ra (Ierleukin 1 Receptor Aagonist) 檢測試劑盒
Phospho-Beta-Catenin (Ser675) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白核黃素磷酸鈉甲基烯酰氧基三(*基硅氧烷基)硅烷Human IL-1R2 (Ierleukin 1 Receptor Type II) 檢測試劑盒
Phospho-Beta-Catenin (Thr41/Ser45) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白吉非羅齊甲基烯酰氧基三(*基硅氧烷基)硅烷Human PSA/KLK3 (Prostate Specific Aigen) 檢測試劑盒
Cateninma gamma gamma連環(huán)蛋白尿素甲基烯酰氧基三(*基硅氧烷基)硅烷Human FGF7 (Fibroblast Growth Factor 7) 檢測試劑盒
Cathepsin B 組織蛋白酶B高烏甲素4,6-三(3,5-二叔丁基-4-羥基芐基)Human LEPR (Leptin Receptor) 檢測試劑盒
DPP-I 組織蛋白酶C乳酸依沙吖啶4,6-三(3,5-二叔丁基-4-羥基芐基)Human LIF (Leukemia Inhibitory Factor) 檢測試劑盒
磷酸化細胞周期檢測點激酶210-(1-萘基)蒽-9-酸Porcine PCPE1 (Procollagen C Proteinase Enhancer 1 ) 檢測試劑盒
磷酸化細胞周期檢測點激酶22,4-二氯-5-硝基三氟甲Porcine CA153 (Carbohydrate Aigen 153) 檢測試劑盒
磷酸化細胞周期檢測點激酶22,4-二氯-5-硝基三氟甲Porcine PRSS8 (Protease, Serine 8) 檢測試劑盒
遺傳性脈絡膜缺乏癥相關蛋白4-溴-3-(三氟甲基)甲Porcine PDK4 (Pyruvate Dehydrogenase Kinase Isozyme 4) 檢測試劑盒
遺傳性脈絡膜缺乏癥相關蛋白樣4-溴-3-(三氟甲基)甲Porcine BCAN (Brevican) 檢測試劑盒
腺癌標志物CHMP2A5-硝基-8-羥基喹啉Porcine TM (Thrombin) 檢測試劑盒
染色質修飾蛋白CHMP65-硝基-8-羥基喹啉Porcine PACAPR (Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide Receptor 1) 檢測試劑盒
染色質修飾蛋白CHMP55-硝基-8-羥基喹啉Porcine KLK6 (Kallikrein 6) 檢測試劑盒
細胞分裂核仁蛋白1抗體賈巴爾普爾毛殼Rat PDP (Pyruvate Dehydrogenase Phosphatase) Kit
深綠木霉Rat PK (Pyruvate Kinase, Liver And RBC) Kit
亞大韌革Rat M2-PK (Pyruvate Kinase,M2) Kit
橘橙色動球Rat GAP (Ras Gtpase Activating Protein) Kit
香乳菇Rat NRG-2 (Neuregulin 2) Kit
鉤狀木霉Rat RANκL (Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B Ligand) Kit
堅強芽孢桿Rat GHRL (Ghrin) Kit
米根霉Rat REG1α (Regenerating Islet Derived Protein 1 Alpha) Kit
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