免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
詳細(xì)介紹：

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抗體的制備過程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進(jìn)行保存?？贵w一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價(jià)，而真空干燥保存時(shí)間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)?？贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補(bǔ)體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)去激活補(bǔ)體系統(tǒng)、激發(fā)補(bǔ)體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動(dòng)免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上?？捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
ARHI/FITC  熒光素標(biāo)記ARHI蛋白IgG腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶BOC-L-絲氨酸甲酯Mouse PAPP-A (pregnancy associated plasma protein A) 檢測試劑盒

ARIP2a/FITC  熒光素標(biāo)記激活素受體2A/激活素受體相互作用蛋白2aIgG磷酸化水通道蛋白25-氯噻吩-2-磺酰氯Mouse Pro-ANP (Pro Atrial Natriuretic Peptide) 檢測試劑盒

ARIP2B/FITC  熒光素標(biāo)記激活素受體2B/激活素受體相互作用蛋白2bIgGADP核糖基化因子15-氯噻吩-2-磺酰氯Mouse PCT (Procalcitonin) 檢測試劑盒

Aromatase P450/FITC  熒光素標(biāo)記芳香化酶蛋白IgG乙型肝炎病X相關(guān)蛋白25-氯噻吩-2-磺酰氯Mouse PGR (Progesterone receptor) 檢測試劑盒

Aromatase P450/FITC  熒光素標(biāo)記芳香化酶/細(xì)胞色素P450/P450IgGADP核糖基化因子5二甲基十八烷基[3-*氧基硅基]氯化銨Mouse Pg (Progesterone) 檢測試劑盒

ART/FITC  熒光素標(biāo)記膠質(zhì)細(xì)胞系源性神經(jīng)營養(yǎng)因子GDNF的一種IgGADP核糖基化因子結(jié)合蛋白二甲基十八烷基[3-*氧基硅基]氯化銨Mouse PHB (Prohibitin) 檢測試劑盒

ASCL1/MASH1 /FITC  熒光素標(biāo)記神經(jīng)母細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)移因子IgGADP核糖基化因子GTP酶激活蛋白1二甲基十八烷基[3-*氧基硅基]氯化銨Mouse PI (Proinsulin) 檢測試劑盒

ASIC1/BNaC2/FITC  熒光素標(biāo)記酸敏感離子通道1IgGADP核糖基化因子相關(guān)蛋白1三(3,5-二叔丁基-4-羥芐基)異脲酸酯Mouse PK2 (Prokineticin 2) 檢測試劑盒   

ChRM1 /FITC  熒光素標(biāo)記蕈堿型乙酰膽堿受體M1IgG促凋亡Bik蛋白2-溴噻唑Rat BCL10 (B-Cell  Leukemia/Lymphoma 10) 檢測試劑盒

ChRM2/FITC  熒光素標(biāo)記蕈堿型乙酰膽堿受體M2IgG癌抑癌蛋白5-溴噻唑Rat BCL3 (B-Cell  Leukemia/Lymphoma 3) 檢測試劑盒

ChRM2/FITC  熒光素標(biāo)記蕈堿型乙酰膽堿受體M2 IgG癌易感基因環(huán)狀結(jié)構(gòu)域蛋白5-溴噻唑Rat BCL-2 (B-Cell Leukemia/Lymphoma 2) 檢測試劑盒

ChRM3/FITC  熒光素標(biāo)記蕈堿型乙酰膽堿受體M3IgG癌相關(guān)抗原BRCAA15-溴噻唑Rat BAK1 (BCL2 Aagonist/Killer 1) 檢測試劑盒

CIB1/FITC  熒光素標(biāo)記鈣-整合素結(jié)合蛋白1IgG腦組織表達(dá)X連鎖蛋白13-巰基酸異辛酯Rat BAX (BCL-2 Associated X Protein) 檢測試劑盒

CIDE-B/FITC  熒光素標(biāo)記促進(jìn)凋亡基因IgGB淋巴細(xì)胞連接蛋白芐氧Rat BMF (BCL-2 Modifying Factor) 檢測試劑盒

CIDEB/FITC  熒光素標(biāo)記CIDEBIgG磷酸化T淋巴細(xì)胞連接蛋白芐氧Rat BAD (BCL-2 Associated Death Promoter) 檢測試劑盒

C-jun/AP-1 /FITC  熒光素標(biāo)記原癌基因蛋白/活化蛋白1IgGBcr1H,1H,2H-全氟-1-十二烯Rat BTC (Betacellulin) 檢測試劑盒
血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2抗體Dinoroseobacter│sp.分離基物: 生物樣/三角褐指藻藻液提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no好氧不產(chǎn)氧光合異養(yǎng)細(xì)多樣性研究培養(yǎng)基: 511生長條件: 28℃液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Escherichia│coli分離基物: 雞提供形式: 凍干物安全等級: 2模式株: no科研及血清定型培養(yǎng)基: 335生長條件: 37真空冷凍干燥法;

Aspergillus niger提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no產(chǎn)丹檸酶, 果膠酶；纖維素酶；培養(yǎng)基: CPDA，PDA，査式生長條件: 25-28℃，好氧，產(chǎn)黑色孢子液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Trichoderma│sp.提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Streptomyces│sp.提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0012生長條件: 30℃-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Glomerella│cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk分離基物: 雀舌黃楊葉片提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no植物病原物，用于炭疽種群的遺傳學(xué)研究和炭疽病害的診斷和防治培養(yǎng)基: 14生長條件: 25定期移植法

黃色南海桿種屬: Meridianimaribacter│flavus分離基物: 南海海洋沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: yes培養(yǎng)基: 444生長條件: 30℃真空冷凍干燥法

Bacillus│vieamensis分離基物: 泥樣提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0223生長條件: 30℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Alternaria│sp.分離基物: 植物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 18-26℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法