免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過(guò)0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
詳細(xì)介紹：

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抗體的制備過(guò)程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過(guò)分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見(jiàn)偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進(jìn)行保存?？贵w一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià)，而真空干燥保存時(shí)間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見(jiàn)的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)?？贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補(bǔ)體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)去激活補(bǔ)體系統(tǒng)、激發(fā)補(bǔ)體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類(lèi)別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過(guò)胎盤(pán)及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過(guò)胎盤(pán)進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動(dòng)免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過(guò)消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對(duì)理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類(lèi)沉淀。在生產(chǎn)上?？捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
LB瓊脂人肺間充質(zhì)干細(xì)胞腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞ABCA1(ATP binding cassette transporter A1)  腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗原

玉米粉瓊脂培養(yǎng)基人脊柱間充質(zhì)干細(xì)胞腎動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞TFPI/LACI  組織因子途徑抑制劑

高氏一號(hào)合成培養(yǎng)基人微血管內(nèi)皮細(xì)胞腎小管上皮細(xì)胞GLUT12  葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白12

L型細(xì)菌高滲糖增菌培養(yǎng)基人上皮細(xì)胞腎小球內(nèi)皮細(xì)胞EGFRvIII  表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體抗原

L型細(xì)菌高滲鹽增菌培養(yǎng)基人成纖維細(xì)胞子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞CD26  CD26抗原

疊氮鈉葡萄糖肉湯人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞卵巢顆粒細(xì)胞ABCG1 peptide  三磷酸腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗原

乙基紫疊氮鈉肉湯人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞Cardiac Troponin T  心肌特異性肌鈣蛋白T

孟加拉紅（虎紅）培養(yǎng)基人臍靜脈平滑肌細(xì)胞淋巴成纖維細(xì)胞BACE( ASP2 )   β分泌酶（抗原）

Fibulin 1/FITC  熒光素標(biāo)記抗“衰老關(guān)鍵蛋白”IgG卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白1522-溴-4-(三氟甲基)苯甲酸Rat MHCⅡ/AgBⅡ/H-1Ⅱ(Major  Histocompatibility ComplexⅡ) 檢測(cè)試劑盒

Phospho-FHIT (Tyr114) /FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化脆性組氨酸三聯(lián)體IgG甘油二酯膽堿磷酸轉(zhuǎn)移酶2,5-雙(三氟甲基)苯胺Rat MHCⅢ/AgBⅢ/H-1Ⅲ(Major  Histocompatibility ComplexⅢ) 檢測(cè)試劑盒

Fibulin-5/FITC  熒光素標(biāo)記抗“衰老關(guān)鍵蛋白”IgG嗜鉻粒素B2,5-雙(三氟甲基)苯胺Rat RETN (Resistin) 檢測(cè)試劑盒

FLG/FITC  熒光素標(biāo)記絲聚蛋白/中間絲蛋白IgG血管加壓素激活鈣啟動(dòng)受體蛋白12,5-雙(三氟甲基)苯胺Rat CA15-3 (Carbohydrate Antigen 15-3) 檢測(cè)試劑盒

FLIP S/L /FITC  熒光素標(biāo)記凋亡調(diào)節(jié)基因之一IgG細(xì)胞色素P450Ⅱj3谷氨酸利塞膦酸鹽半五水合物Rat MAT (Matrilysin) 檢測(cè)試劑盒

FLIPS/FITC  熒光素標(biāo)記凋亡調(diào)節(jié)基因之一（短型）IgG鈣激活氯離子通道4三羥甲基烷*基烯酸酯Rat MMP-1 (Matrix Metalloproteinase 1) 檢測(cè)試劑盒

FN /FITC  熒光素標(biāo)記纖維連結(jié)蛋白IgG周期素依賴(lài)性激酶6三羥甲基烷*基烯酸酯Rat MMP-2 (Matrix Metalloproteinase 2) 檢測(cè)試劑盒

FN/RBITC  紅色熒光素標(biāo)記纖維連接蛋白IgG周期素依賴(lài)性激酶73，4，5-TrimethoxybenzhydrazideRat MMP-3 (Matrix Metalloproteinase 3) 檢測(cè)試劑盒
過(guò)氧化物酶體肉堿酰基轉(zhuǎn)移酶抗體柑橘藻斑病*Mouse FLT1/VEGFR1 (Vascular Endothial Growth Factor Receptor 1)  Kit 小鼠腎癌細(xì)胞

紡錘形賴(lài)氨酸芽孢桿Mouse VEGFR-2/KDR (Vascuoar Endothial Growth Factor Receptor 2)  Kit 人類(lèi)冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

空泡極單胞Mouse HO-1 (Heme Oxygenase 1)  Kit人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞

地衣芽孢桿Mouse HO-2 (Heme Oxygenase 2, Decycling)  Kit  小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞株

食蔗糖葡糖酸醋桿Mouse RANκ (Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B)  Kit人正常胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞

釀酒酵母Mouse HJV (Hemojuvin)  Kit  人微血管內(nèi)皮細(xì)胞

炭疽沉淀素血清Mouse HPA (Heparanase)  Kit 人多形性惡性膠質(zhì)瘤細(xì)

膠胞（可訂購(gòu)）Mouse ALB (Albumin)  Kit肝枯否細(xì)胞