免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過(guò)0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
詳細(xì)介紹：

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抗體的制備過(guò)程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過(guò)分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進(jìn)行保存?？贵w一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià)，而真空干燥保存時(shí)間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)?？贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補(bǔ)體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)去激活補(bǔ)體系統(tǒng)、激發(fā)補(bǔ)體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過(guò)胎盤及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過(guò)胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動(dòng)免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過(guò)消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對(duì)理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上?？捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
Bcl-10(phospho Ser218)/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化Bcl-10IgGα2纖溶酶色素上皮衍生因子5-氨基鄰甲酚Mouse SESN1 (Sestrin 1) 檢測(cè)試劑盒  

Bcr/CD3D/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠T淋巴細(xì)胞受體IgG膜粘連蛋白75-氨基鄰甲酚Mouse SESN2 (Sestrin 2) 檢測(cè)試劑盒

Phospho-Bcr(p-Tyr177)/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化T淋巴細(xì)胞受體IgG早老素γ分泌酶5-氨基鄰甲酚Mouse SESN3 (Sestrin 3) 檢測(cè)試劑盒  

BCRP/ABCG2/BXP-21 /FITC  熒光素標(biāo)記三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2IgG鈉ATP酶蛋白a12-氨基-5-酚Mouse SOX3 (Sex Determining Region Y Box Protein 3) 檢測(cè)試劑盒  

Bdkrb2/B2R/FITC  熒光素標(biāo)記緩激肽B2受體IgGRho鳥苷酸交換因子22-氨基-5-酚Mouse SHBG (Sex Hormone-Binding Globulin) 檢測(cè)試劑盒

BDNF/FITC  熒光素標(biāo)記BDNF蛋白IgG磷酸化Rho鳥苷酸交換因子24-氨基-3-酚Mouse SIGLEC3 (Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 3) 檢測(cè)試劑盒  

BECN1/FITC  熒光素標(biāo)記一種抑癌基因IgG去整合素樣金屬蛋白酶94-氨基-3-酚Mouse SIGLEC12 (Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 12) 檢測(cè)試劑盒  

EpCAM/CD326/FITC  熒光素標(biāo)記上皮細(xì)胞特異性EpCAM/CD326蛋白IgG艾滋病病制約錨定蛋白4-氨基-3-酚Mouse SRP10 (Signal Recognition Particle 9kDa) 檢測(cè)試劑盒  

C-Peptide( C-PEP )/FITC  熒光素標(biāo)記C-肽IgGBRD1蛋白羥甲基膦酸二乙酯Rat CKLFSF7 (Chemokine Like Factor Superfamily 7) 檢測(cè)試劑盒

CPSA/FITC  熒光素標(biāo)記鼠抗人復(fù)合前列腺特異性抗原單克隆IgGBRPF3蛋白羥甲基膦酸二乙酯Rat CKLFSF10 (Chemokine Like Factor Superfamily 10) 檢測(cè)試劑盒

CPSF4/CPSF30/FITC  熒光素標(biāo)記剪切和多聚腺苷酸化特異性因子4IgGBXDC1蛋白3,4,5-*氧基甲酰胺Rat CCKAR (Cholecystokinin A Receptor) 檢測(cè)試劑盒

CPT1A/FITC  熒光素標(biāo)記抗肉堿棕櫚?；D(zhuǎn)移酶1AIgG腦蛋白443,4,5-*氧基甲酰胺Rat CETP (Cholest Erolester Transfer Protein) 檢測(cè)試劑盒

CR/FITC  熒光素標(biāo)記鈣結(jié)合蛋白IgG腦蛋白44樣蛋白2,5-二基溴化鎂 (1M THF溶液)Rat AGT (Angiotensinogen) 檢測(cè)試劑盒

MO25 alpha/CAB39/FITC  熒光素標(biāo)記鈣結(jié)合蛋白39IgG嗜乳脂蛋白樣2N-(叔丁氧羰基)-L-谷氨酸1-芐酯Rat CH (Cholesterol) 檢測(cè)試劑盒

CRACC/Slamf7/CD319R/FITC  熒光素標(biāo)記CD319IgG嗜乳脂蛋白樣8N-(叔丁氧羰基)-L-谷氨酸1-芐酯Rat CHRM2 (Cholinergic Receptor, Muscarinic 2) 檢測(cè)試劑盒

A Raf(phospho Ser214)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化A-RafIgG嗜乳脂蛋白樣9Boc-L-天冬氨酸1-芐酯Rat CG (Chorionic Gonadotrophin) 檢測(cè)試劑盒
調(diào)亡誘導(dǎo)因子抗體Bacillus│thuringiensis提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式株: no培養(yǎng)基: 2生長(zhǎng)條件: 28℃其他

Bacillus│thuringiensis提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式株: no培養(yǎng)基: 2生長(zhǎng)條件: 30℃真空冷凍干燥法

Pseudomonas│aeruginosa提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式株: no培養(yǎng)基: CM0002生長(zhǎng)條件: 37℃-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Rhodotorula│mucilaginosa分離基物: 生物樣/未知魚3胃提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式株: no共生微生物/魚類共生培養(yǎng)基: 513生長(zhǎng)條件: 28℃液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法

Hafnia│alvei分離基物: 砂土提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式株: no培養(yǎng)基: 2生長(zhǎng)條件: 37℃-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;其他

Streptomyces│sp.分離基物: 表面土壤提供形式: 其他安全等級(jí): 1模式株: no分類學(xué)及微生物藥物學(xué)的研究培養(yǎng)基: 12生長(zhǎng)條件: 28℃其他

Rahnella│aquatilis分離基物: 水樣/表層海水提供形式: 凍干物模式株: no潛在的有機(jī)污染物降解/分離自石油富集群，單無(wú)降解能力。培養(yǎng)基: 1001生長(zhǎng)條件: 28℃液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Tarzetta│catinus (Holmsk.) Korf & J.K. Rogers分離基物: 子實(shí)體提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式株: no培養(yǎng)基: 14生長(zhǎng)條件: 25定期移植法

Streptomyces│microflavus分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式株: no培養(yǎng)基: 0012生長(zhǎng)條件: 28℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法