免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
詳細(xì)介紹：

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抗體的制備過程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進(jìn)行保存?？贵w一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價(jià)，而真空干燥保存時(shí)間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)?？贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補(bǔ)體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)去激活補(bǔ)體系統(tǒng)、激發(fā)補(bǔ)體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上?？捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
transgin/SM22-specific aibody22 kDa Q01995Human, Mouse, Rat

Transgin-2-specific aibody22 kDa P37802Human, Mouse, Rat

Transketolase aibody68 kDaP29401Human, Mouse, Rat

Transketolase aibody68 kDa P29401Human, Mouse

Transportin-1 aibody102 kDa Q92973Human, Mouse

TRAP1 aibody82 kDaQ12931Human, Mouse, Rat

TRAPA/SSR1 aibody34 kDa P43307Human

富含亮氨酸重復(fù)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體別 名 Leucine rich repeats and death domain coaining; Leucine-rich repeats and death domain coaining; MGC16925; p53-induced protein with a death domain; PIDD; DKFZp434D229; PIDD_HUMAN.

神經(jīng)突觸粘附樣分子1抗體別 名 Leucine rich repeat and fibronectin type III domain coaining 1; Leucine rich repeat and fibronectin type III domain coaining protein 1; Leucine-rich repeat and fibronectin type III domain-coaining protein 1; LRFN 1; lrfn1; LRFN1_HUMAN; SALM 2; SALM2; Synaptic adhesion like molecule 2; Synaptic adhesion-like molecule 2.

脂質(zhì)磷酸磷酸酶相關(guān)蛋白1/可塑性相關(guān)基因3抗體別 名 plasticity rated gene 3; lipid phosphate phosphatase rated protein type 1; LPPR1; MGC26189; plasticity rated gene 3 protein; PRG 3; PRG-3; PRG3; RP11-35N6.1; LPPR1_HUMAN; Lipid phosphate phosphatase-rated protein type 1; Plasticity-rated gene 3 protein.
磷酸化Bcl-xL(Ser62)抗體Halomonas│meridiana分離基物: 水樣/表層海水提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式株: no近海細(xì)培養(yǎng)基: 471生長條件: 28℃液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Glomerella│cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk分離基物: 雀舌黃葉提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 25定期移植法

Candida│maltosa分離基物: 樹膠提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0013生長條件: 25-28℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Corynebacterium│glutamicum Ⅰ提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no以葡萄糖為原料發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸。培養(yǎng)基: CM0050生長條件: 30℃真空冷凍干燥法

Metarhizium│anisopliae (Metschn.) Sorokīn分離基物: 一種土蝽成蟲提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no生物防治培養(yǎng)基: 14生長條件: 25定期移植法

Pseudomonas│stutzeri分離基物: 沉積物/表層沉積物提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no潛在的有機(jī)污染物降解/分離自草甘膦富集群培養(yǎng)基: 471生長條件: 28℃液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Rhodobacter│sp.分離基物: 土壤/紅樹林根部深處污泥提供形式: 其它安全等級: 1模式株: no污染物降解培養(yǎng)基: 1004生長條件: 25-35℃液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Aspergillus│usamii提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no以橡子為原料生產(chǎn)酒精。培養(yǎng)基: CM0015生長條件: 28-30℃真空冷凍干燥法

Pichia│farinosa提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0013生長條件: 28℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法