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免疫熒光技術(shù)的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | ?;o酶A脫氫酶長鏈抗體 |
英文名稱 | ACADL |
貨號 | BJ-K6396 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習性:
(1)結(jié)合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合,在體內(nèi)導致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)??贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補體:抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后,借助暴露的補體結(jié)合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結(jié)合不同種的細胞,產(chǎn)生不同的疚,參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質(zhì),也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì),均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
Mesothelioma 間質(zhì)細胞蛋白利巴韋林1-金剛烷甲酰氯Human ETRB (Endothelin Receptor B) 檢測試劑盒
TORC1/CRTC1 環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1阿昔洛韋1-金剛烷甲酰氯Human GS (Gelsolin) 檢測試劑盒
Phospho-Torc1/Crtc1 (Ser151) 磷酸化CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1鳥嘌呤N'N-二(4-磺丁基)-3,5-二胺二鹽(MADB)Human TM (Thrombin)檢測試劑盒
MAP3K8/TPL2 絲裂原活化蛋白激酶激酶8胱氨酸2-氨基腺嘌呤核苷Human TAT (Thrombin/Aithrombin Complex) 檢測試劑盒
Phospho-MAP3K8/Tpl2 (Ser400) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶8人胰島素2-氨基腺嘌呤核苷Human TSP1 (Thrombin Sensitive Protein 1) 檢測試劑盒
Phospho-MAP3K8/Tpl2 (Thr290) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶8重組胰島素單體-二聚體2--3-甲基吡啶Human TR (Thrombin Receptor) 檢測試劑盒
MATH1 腸道分化干細胞MATH-1蛋白重組人生長激素2--3-甲基吡啶Human PT (Prothrombin) 檢測試劑盒
Morphine 單克隆重組人生長激素單體-二聚體2--3-甲基吡啶Human F1+2 (Prothrombin Fragme 1+2) 檢測試劑盒
叉頭蛋白O1Monkey CYSLTR1 (Cysteinyl Leukotriene Receptor 1) 檢測試劑盒
鐵蛋白重鏈Monkey NUP107 (Nucleoporin 107kDa) 檢測試劑盒
類固受體復合物蛋白FKBP5Monkey REG1β (Regenerating Islet Derived Protein 1 Beta) 檢測試劑盒
纖維性鞘結(jié)合蛋白1Monkey NLR (NOD-Like Receptor9) 檢測試劑盒
纖維細胞生長因子結(jié)合蛋白2Monkey CaN (Calcineurin) 檢測試劑盒
肌動蛋白結(jié)合蛋白Fascin3Monkey VCAM-1/CD106 (soluble Vascuolar Cell Adhesion Molecule 1) 檢測試劑盒
結(jié)構(gòu)特異性核酸酶FEN1Monkey DKK2 (Dickkopf Related Protein 2) 檢測試劑盒
FAM61B蛋白Monkey GNLY (Granulysin) 檢測試劑盒
?;o酶A脫氫酶長鏈抗體地中海中慢生根瘤*Porcine CX3CL1 (Chemokine C-X3-C-Motif Ligand) Kit
扣囊復膜孢酵母Porcine P12 (Caspase 12) Kit
鼠李糖乳桿Porcine TGF-β3 (Transforming Growth Factor β3) Kit
紅城紅球Porcine NF-κB p65 (Nuclear Factor-κB p65) Kit
根瘤Porcine OCLN (Occludin) Kit
熱帶假絲酵母Porcine MIgA (Membrane IgA) Kit
大腸埃希氏定量質(zhì)控株*Porcine Cyt-C (Cytochrome C) Kit
群結(jié)腐霉Porcine ApoE (Apolipoprotein E) Kit
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