免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
詳細(xì)介紹：

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抗體的制備過程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進(jìn)行保存?？贵w一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià)，而真空干燥保存時(shí)間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)。抗體是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補(bǔ)體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)去激活補(bǔ)體系統(tǒng)、激發(fā)補(bǔ)體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動(dòng)免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對(duì)理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
AMPK beta-1(phospho Ser108) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1IgGp21活化蛋白激酶ARHG73-(三氟甲基)芐胺Mouse ODF (Osteoclast Differeiation Factor) 檢測(cè)試劑盒

AMPK beta-1(phospho Ser182) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1IgG磷酸化肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白Girdin1,2-亞甲二氧基Mouse ON (Osteonectin) 檢測(cè)試劑盒

AMPK Beta1/FITC  熒光素標(biāo)記腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1IgG2-氨基乙硫雙加氧酶1,2-亞甲二氧基Mouse OPGL (Osteoprotegerin Ligand) 檢測(cè)試劑盒

Amylin/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗糖尿病相關(guān)肽/胰島淀粉樣肽IgG血管緊張素Ⅱ-1型受體 7Mouse OVA sIgE (Ovalbumin Specific IgE) 檢測(cè)試劑盒

Ang- II /FITC  熒光素標(biāo)記血管緊張素IIIgG腺苷A2b受體/神經(jīng)生長(zhǎng)因子1受體 7Mouse CA125 (Carbohydrate Aigen 125) 檢測(cè)試劑盒

ANG-2/FITC  熒光素標(biāo)記血管生成素-2IgG去整合素樣金屬蛋白酶19十乙二單甲Mouse pIκBα (Phospho-Inhibitory Subunit of NF Kappa B Alpha) 檢測(cè)試劑盒

Ankyrin G/ANK-3/ankyrin 3/FITC  熒光素標(biāo)記錨定蛋白GIgG原癌基因AF4蛋白二甲?；?L-,無水Mouse OLAb (Oxidized Lowdensity Lipoprotein Aibody) 檢測(cè)試劑盒

ANGPTL1/ANG-1 /FITC  熒光素標(biāo)記血管位蛋白樣1/血管生成素樣蛋白-1IgG整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶樣1蛋白二甲酰基-L-,無水Mouse MAPK14 (Mitogen Activated Protein Kinase 14) 檢測(cè)試劑盒

CD229/SLAMF3/FITC  熒光素標(biāo)記CD229IgG人β亞基人絨毛膜促性腺激素(β HCG)5-甲基-1,10-菲咯啉Rat IL-1β (Ierleukin 1 Beta) 檢測(cè)試劑盒

CD244/NKR2B4/SLAMF4/FITC  熒光素標(biāo)記CD244IgG鈣激活通道蛋白 α 15,6-二甲基-1,10-菲咯啉Rat IL-2 (Ierleukin 2) 檢測(cè)試劑盒

FRSF13B/FRSF14B/TACI/FITC   熒光素標(biāo)記腫瘤壞死因子受體超家族成員13BIgG鈣激活通道蛋白 α 15,6-二甲基-1,10-菲咯啉Rat IL-4 (Ierleukin 4) 檢測(cè)試劑盒

CD272/BTLA/FITC  熒光素標(biāo)記B和T淋巴細(xì)胞衰減蛋白IgG蛇巴曲酶四氯Rat IL-6 (Ierleukin 6) 檢測(cè)試劑盒

Cdc2 p34/FITC  熒光素標(biāo)記周期素依賴性蛋白激酶p34IgGBH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白四氯Rat IL-10 (Ierleukin 10) 檢測(cè)試劑盒

Phospho-cdc2 (Thr14)/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化周期素依賴激酶1IgGBax烯Rat ANP (Atrial Natriuretic Peptide) 檢測(cè)試劑盒

Phospho-cdc2 (Tyr15) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化周期素依賴激酶1IgGBcl-2烯Rat F-α (Tumor Necrosis Factor Alpha) 檢測(cè)試劑盒

Cdc6/FITC  熒光素標(biāo)記細(xì)胞分裂周期蛋白6IgG腦源神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4-羥甲酸Rat VEGF (Vascular Endothelial cell Growth Factor) 檢測(cè)試劑盒
腦鈉通道蛋白4抗體Vibrio│neptunius分離基物: 三疣梭子蟹提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式株: no培養(yǎng)基: 223生長(zhǎng)條件: 30℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Lasiodiplodia│theobromae (Pat.) Griffon & Maubl.分離基物: 腐木提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式株: no培養(yǎng)基: 14生長(zhǎng)條件: 25定期移植法

Flammulina│velutipes提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式株: no食用培養(yǎng)基: 0017生長(zhǎng)條件: 25-28℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Sporothrix│sp.分離基物: 黃櫨提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式株: no培養(yǎng)基: 14生長(zhǎng)條件: 25定期移植法

Corynebacterium│casei分離基物: 土壤提供形式: 凍干物模式株: no培養(yǎng)基: 33生長(zhǎng)條件: 32℃-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Mucor│racemosus提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式株: no培養(yǎng)基: 0014生長(zhǎng)條件: 25-28℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Alternaria│sp.提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式株: no抗癌活性培養(yǎng)基: CM0014生長(zhǎng)條件: 28C真空冷凍干燥

Streptomyces│californicus提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式株: no產(chǎn)生 viomycin 紫霉素培養(yǎng)基: CM0012生長(zhǎng)條件: 28C真空冷凍干燥

Alternaria│alternata (Fr.) Keissl.提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式株: no培養(yǎng)基: 14生長(zhǎng)條件: 25定期移植法