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免疫熒光技術(shù)的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 補體C1q和腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白5抗體 |
英文名稱 | CTRP5 |
貨號 | BJ-K7849 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習性:
(1)結(jié)合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合,在體內(nèi)導致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)??贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補體:抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后,借助暴露的補體結(jié)合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結(jié)合不同種的細胞,產(chǎn)生不同的疚,參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質(zhì),也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì),均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
DDX58 antibody109 kDaO95786Human資源名稱簡單類諾卡氏菌分離基物:土壤提供形式:凍干物安全等級:1
DDX58 antibody110 kDa O95786Human, Rat資源名稱成團芽球菌分離基物:brackish water提供形式:凍干物安全等級:1
DDX6 antibody54 kDa P26196Human, Mouse, Rat資源名稱蘇云金芽胞桿菌莫里遜亞種提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no
DEAF1 antibody60-63 kDa, 72 kDa O75398Human, Mouse, Rat資源名稱蘇云金芽胞桿菌巴基斯坦亞種提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no
Decorin antibody45 kDa P07585Human, Mouse, Rat資源名稱雙歧桿菌提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no
DECR2 antibody30 kDa Q9NUI1Human, Mouse 資源名稱尖鐮孢西瓜?;?西瓜枯萎病菌)(斜面)提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no
DEDD antibodyO75618Human資源名稱變黑輪枝菌提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no
朝鮮芽孢八疊球菌號:20015英文名字:Valinomycin分子式:C54H90N6O18分子量:1111.32物理性狀及指標
Sphingomonasyantirgensis號:1476-53-5英文名字:Novobiocinsodium分子式:C31H35N2O11.Na分子量:634.61物理性狀及指標
Sphingomonasdokdonensis號:92309-29-0英文名字:ImipenemandCilastatinSodium分子式:C12H17N3O4S.C16H25N2NaO5S.H2O分子量:697.80物理性狀及指標:
Herpetosiphonaurantiacus號:23110-15英文名字:FumagillinfromAspergillusfumigatus分子式:C26H34O7分子量:458.54物理性狀及指標
檸檬泛菌號:55721-31英文名字:SalinomycinSodiumSalt分子式:C42H69NaO11分子量:772.98描述及應(yīng)用:
補體C1q和腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白5抗體大腸埃希菌Human pMAPT /pTAU (phosphorylated microtubule-associated protein tau) kit正常人腎成纖維細胞
雅致小克銀漢霉Human HSD17b10 (17-Beta-Hydroxysteroid Dehydrogenase Type 10) Kit人甲狀腺狀癌細胞
黃柄曲霉Human HDAC1 (Histone Deacetylase 1) Kit人漿細胞骨髓瘤細胞
棲土曲霉Human MICA (major histocompatibility complex class I chain-rated gene A) Kit人彌漫大B淋巴瘤細胞
黑化鏈霉菌Human VEGF(Vascular Endothial cl Growth Factor) KIT小鼠膀胱平滑肌細胞
環(huán)帶毛霉Human KISS(Kisspeptin) KIT人胚胎肝細胞
麥芽糖假絲酵母Human ENG(Endoglin) Kit 人膽囊上皮細胞
分枝枝頂孢Human SCUBE1 (Signal Peptide, CUB and EGF-like Domain-containing Protein 1) Kit人胃黏膜正常上皮細胞
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