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免疫熒光技術(shù)的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | APS抗體 |
英文名稱 | APS |
貨號 | BJ-K6807 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習性:
(1)結(jié)合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應抗原發(fā)生特異性結(jié)合,在體內(nèi)導致生理或病理效應;在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應。抗體是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結(jié)合后,借助暴露的補體結(jié)合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結(jié)合不同種的細胞,產(chǎn)生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質(zhì),也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì),均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
Phospho-Zyxin (Ser142/Ser143) 磷酸化斑聯(lián)蛋白乙脫氫酶2(S)-N-Boc-2-甲酸哌啶Mouse HNF4a (Hepatocyte Nuclear Factor 4 Alpha) 檢測試劑盒
人T淋巴細胞亞群檢測盒 人T淋巴細胞亞群檢測盒 (T-Subset)膜粘連蛋白101-溴-3-(二氟甲氧基)Mouse HNF6a (Hepatocyte Nuclear Factor 6 Alpha) 檢測試劑盒
Melamine 三聚胺前梯度同源蛋白21-溴-3-(二氟甲氧基)Mouse HNF6b (Hepatocyte Nuclear Factor 6 Beta) 檢測試劑盒
Melamine 三聚胺單克隆乙脫氫酶54-乙酰氧基乙烯Mouse HDGF (Hepatoma Derived Growth Factor)檢測試劑盒
抗K3蛋白通用轉(zhuǎn)錄因子IIA樣因子4-乙酰氧基乙烯Mouse Hepc (Hepcidin) 檢測試劑盒
自噬相關蛋白4D氯鉻酸吡啶鎓Mouse HNRPA1 (Heterogeneous Nuclear Ribonucleoprotein A1) 檢測試劑盒
MCKD2/UMOD 尿調(diào)節(jié)蛋白自噬相關蛋白9A氯鉻酸吡啶鎓Mouse HK1 (Hexokinase 1) 檢測試劑盒
MCKD2/UMOD UMOD蛋白縮酶C氯鉻酸吡啶鎓Mouse HK (Hexokinase) 檢測試劑盒
顆粒酶KMonkey GM-CSF Ab (Ai-Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor Aibody) 檢測試劑盒
甘油磷酸二酯酶磷酸結(jié)構(gòu)域5Monkey LFA-2/CD2 (Lymphocyte Function Associated Aigen 2) 檢測試劑盒
γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶Monkey ON (Osteonectin) 檢測試劑盒
G1氨基丁酸A型受體α1Monkey α-La (Alpha-Lactalbumin) 檢測試劑盒
谷氨酸脫羧酶-65Monkey sCKR (Soluble Cytokine Receptor) 檢測試劑盒
谷氨酸脫羧酶-65(C端)Monkey Slit2 (Slit Homolog 2) 檢測試劑盒
半乳糖凝集素3Monkey F11 (Coagulation Factor XI) 檢測試劑盒
神經(jīng)生長相關蛋白43Monkey ApoB (Apolipoprotein B) 檢測試劑盒
APS抗體停乳鏈球種屬: Streptococcus│dysgalactiae提供形式: 凍干物安全等級: 2模式株: no培養(yǎng)基: CM0109生長條件: 37℃真空冷凍干燥法
Klebsiella│pneumoniae提供形式: 凍干物;凍結(jié)物模式株: no培養(yǎng)基: 820生長條件: 22℃-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Streptomyces│sp.分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no抗糞腸球培養(yǎng)基: CM0027生長條件: 28C真空冷凍干燥
Avipoxvirus│Fowlpox virus分離基物: 病雞結(jié)痂提供形式: 凍干物安全等級: 2模式株: no研究培養(yǎng)基: 0生長條件: 37真空冷凍干燥法;
Candida│pseudorugosa分離基物: ICU患者痰標本提供形式: 凍干物安全等級: 2模式株: no培養(yǎng)基: 0013生長條件: 20℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
蠟狀芽孢桿種屬: Bacillus│cereus分離基物: 牛奶提供形式: 凍干物安全等級: 2模式株: no培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
少根根霉種屬: RhzopusarrhizusFisher安全等級: 1模式株: no釀酒培養(yǎng)基: 50生長條件: 28-30℃
Lactobacillus fermeum分離基物: 酸奶提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: MRS培養(yǎng)基:酪胨 10.0g,牛肉粉 8.0g,酵母粉 4.0 g,葡萄糖 20.0 g,硫酸鎂 0.2 g,鈉 5.0 g,檸檬酸三銨 2.0 g,磷酸氫二鉀 2.0 g,硫酸錳 0.05 g,吐溫80 1.0 g,蒸餾水 1000mL。pH6.2±0.2。121℃,15min。生長條件: 37℃,微好氧真空冷凍干燥法
Botrytis│cinerea提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no低溫培養(yǎng)基: 0014生長條件: 15-20℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
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