免疫熒光技術(shù)的實驗步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強度。
詳細(xì)介紹：

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抗體的制備過程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進(jìn)行保存?？贵w一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價，而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)。抗體是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補體結(jié)合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上?？捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
Beta-Amyloid(31-35)/FITC  熒光素標(biāo)記β淀粉樣肽（31-35）IgG酰基鞘氨脫酰酶24,4'-二吡啶基二硫Mouse INSR-β (Insulin Receptor Beta Subunit) 檢測試劑盒

14-3-3/FITC  熒光素標(biāo)記14-3-3蛋白IgG脂肪細(xì)胞特異性粘附分子4-氯-6-甲氧基嘧啶Mouse IGF-2 (Insulin Like Growth Factor 2) 檢測試劑盒

14-3-3 ζ(phospho Ser58)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化14-3-3 ζIgG腺相關(guān)病54-氯-6-甲氧基嘧啶Mouse IGFBP-1 (Insulin-Like Growth Factor Binding Protein 1) 檢測試劑盒

2,4-D/FITC  熒光素標(biāo)記2，4-二氯氧IgG腺苷酸活化蛋白激酶γ3PR-619Mouse IGFBP-2 (Insulin-Like Growth Factor Binding Protein 2) 檢測試劑盒

4E-BP1/EIF4EBP1/FITC  熒光素標(biāo)記4E結(jié)合蛋白1IgG腺苷單磷酸活化蛋白激酶β2鵝去氧膽酸Mouse IGFBP-4 (Insulin-Like Growth Factor Binding Protein 4) 檢測試劑盒

4EBP1(phospho Ser64) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化4E結(jié)合蛋白1IgG磷酸化細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1鵝去氧膽酸Mouse IGFBP-6 (Insulin-Like Growth Factor Binding Protein 6) 檢測試劑盒

4EBP1(phospho Thr37/46) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化4E結(jié)合蛋白1IgG細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC12,5-二氟甲Mouse I-PTH (iact Parathormone) 檢測試劑盒

phospho-4EBP1 (Ser65/Thr70)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化eIF4E結(jié)合蛋白IgG磷酸化蛋白激酶B22,5-二氟甲Mouse ICAM-1 (iercellular adhesion molecule 1) 檢測試劑盒

慶大霉素Monkey ELA2B (Elastase 2B) 檢測試劑盒

半乳糖凝集素9Monkey GFAP (Glial Fibrillary Acidic Protein) 檢測試劑盒

促代謝型谷氨酸受體2+4Monkey GUK1 (Guanylate Kinase 1) 檢測試劑盒

GPNMBMonkey FSF14 (Tumor Necrosis Factor Ligand Superfamily, Member 14)檢測試劑盒

γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶2輕鏈Monkey PLG (Plasminogen) 檢測試劑盒

γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶5輕鏈Monkey PS (Plasma Aicoagula Protein S) 檢測試劑盒

γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶7輕鏈Monkey Gal (α-Galactoyl) 檢測試劑盒

溶酶體累積病相關(guān)蛋白/口吃相關(guān)蛋白Monkey AIF (Apoptosis Inducing Factor) 檢測試劑盒
磷酸化蛋白激酶B2抗體球形賴氨酸芽孢桿種屬: Lysinibacillus│sphaericus分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

溶藻弧種屬: Vibrio│alginolyticus提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基質(zhì)量控制。培養(yǎng)基: CM0444生長條件: 37℃-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

海動物腸希瓦氏種屬: Shewanella│mariniestina分離基物: Squid body提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: yes模式株培養(yǎng)基: 471生長條件: 20-25℃液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Amanita│japanica提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 25-28℃-80℃冰箱凍結(jié)法；礦物油法；定期移植法

中間蒼白桿種屬: Ochrobactrum│iermedium分離基物: Blood culture提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: yes模式株培養(yǎng)基: 2生長條件: 28℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Micromonospora│sp.分離基物: 淤泥提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no抗細(xì)；抗大腸桿培養(yǎng)基: CM0012生長條件: 35-37C真空冷凍干燥

釀酒酵母種屬: Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no酒精酵母培養(yǎng)基: CM0013生長條件: 25-28℃礦物油法；定期移植法

Nectriella│sp.分離基物: 千層塔植物莖提供形式: 凍干物模式株: no未知培養(yǎng)基: 14生長條件: 25-28℃真空冷凍干燥法；定期移植法

Mesorhizobium│sp.分離基物: 紫云英根系根瘤內(nèi)提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no生物固氮培養(yǎng)基: 0063生長條件: 28-30℃-80℃冰箱凍結(jié)法