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免疫熒光技術的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產品名稱 | 軸蛋白1抗體 |
英文名稱 | Axin1 |
貨號 | BJ-K6714 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產品僅用于科研保存前需經除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習性:
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應抗原發(fā)生特異性結合,在體內導致生理或病理效應;在體外產生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應??贵w是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結合不同種的細胞,產生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質,也具有刺激機體產生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質凝固變性的物質,均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經透析法將其純化。
TIF1 beta/KAP1 轉錄中介因子Tif1β磷酸化活化復制因子25-氨基-1-戊Mouse CNP (C-type natriuretic peptide) 檢測試劑盒
Phospho-TIF1beta (Ser824) 磷酸化轉錄中介因子Tif1β磷酸化活化復制因子2乙烯基吡咯烷酮-乙烯酯共聚Mouse CTACK (Cutaneous T-Cell Attracting Chemokine) 檢測試劑盒
TIF1 gamma/Trim33 轉錄中介因子Tif1γ磷酸化活化復制因子2乙烯基吡咯烷酮-乙烯酯共聚Mouse β-CTx (Beta Crosslaps) 檢測試劑盒
Tissue factor 組織因子磷酸化活化復制因子23-乙炔基吡啶Mouse CXCR3 (CXC-chemokine receptor 3) 檢測試劑盒
TFPI/LACI 組織因子途徑抑制劑活化轉錄因子5叔十二硫Mouse COL2 (Collagen Type Ⅱ) 檢測試劑盒
TFPI-2 組織因子途徑抑制劑-2活化轉錄因子6β叔十二硫Mouse CREB (Cyclic AMP Response Eleme Binding Protein) 檢測試劑盒
TGF-alpha 轉移生長因子–αAICAR甲?;D移酶3,5-二甲基異惡唑-4-羧酸Mouse c-myc (c-myc Oncogene Product) 檢測試劑盒
TGF- Beta 1 轉化生長因子β1磷酸化毛細血管擴張性共濟失調癥突變蛋白3,5-二甲基異惡唑-4-羧酸Mouse CDK5 (Cyclin Depende Kinase 5) 檢測試劑盒
GTP酶IMAP家族成員2Monkey PA-IgM (Plaet Associated Aibody) 檢測試劑盒
GTP酶IMAP家族成員3Monkey ELA3B (Elastase 3B) 檢測試劑盒
GTP酶IMAP家族成員4Monkey TA (Ai-Teichoic Acid Aibody) 檢測試劑盒
GTP酶IMAP家族成員5Monkey GADL1 (Glutamate Decarboxylase Like Protein 1) 檢測試劑盒
G蛋白調節(jié)誘導神經突增生蛋白2Monkey Apo A1-Ab (Ai-Apolipoprotein A1 aibody) 檢測試劑盒
GTP酶IMAP家族成員7Monkey GSTpi (Glutathione S Transferases Pi) 檢測試劑盒
GTP酶IMAP家族成員8Monkey PS (Phosphatidylserine) 檢測試劑盒
G蛋白調節(jié)誘導神經突增生蛋白1Monkey CA19-9 (Carbohydrate aigen19-9) 檢測試劑盒
軸蛋白1抗體Sporobolomyces│roseus分離基物: Bambusa sp.植物葉片提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0013生長條件: 17℃液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Alphaherpesvirinae│Duck plague virus分離基物: 病雞結痂提供形式: 凍干物安全等級: 2模式株: no研究培養(yǎng)基: 0生長條件: 37真空冷凍干燥法;
羊布氏種屬: Brucella│melitensis提供形式: 凍干物安全等級: 3模式株: no生產獸用死苗,強株培養(yǎng)基: CM0112生長條件: 37℃-80℃冰箱凍結法
卷枝毛霉lusitanicus變型種屬: Mucor│circinelloides f. lusitanicus提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: yesType strain of M. jauchae培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25℃液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Mycobacterium│paratuberculosis分離基物: 副結核病牛腸提供形式: 凍干物安全等級: 2模式株: no科研及血清定型培養(yǎng)基: 182生長條件: 37真空冷凍干燥法;
Aspergillus│niger提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no產檸檬酸。培養(yǎng)基: CM0013生長條件: 35℃礦物油法
Bacillus│vallismortis分離基物: 哈密瓜汁提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no抑制棉花枯萎病、抑制梨綠霉病原、抑制梨黑霉病原、抑制炭疽霉病原培養(yǎng)基: CM0003生長條件: 35-37℃真空冷凍干燥法
Streptomyces│echinatus分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: CM0039生長條件: 28C真空冷凍干燥
Zobellella│denitrificans分離基物: 沉積物/表層沉積物提供形式: 凍干物模式株: no潛在的反硝化/以硝酸根為電子受體分離,可用于生物脫氮研究;產酶微生物/淀粉酶培養(yǎng)基: 472生長條件: 28℃液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
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