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免疫熒光技術(shù)的實驗步驟:
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上,十分鐘后棄去,使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液,使其*覆蓋標(biāo)本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標(biāo)本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 磷酸化APP(Tyr757)淀粉樣肽前體蛋白抗體 |
英文名稱 | phospho-Amyloid Precursor Protein (Tyr757) |
貨號 | BJ-K6721 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性:
(1)結(jié)合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合,在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)。抗體是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補體:抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后,借助暴露的補體結(jié)合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結(jié)合不同種的細胞,產(chǎn)生不同的疚,參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質(zhì),也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì),均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
CD97 CD97髓系、淋巴、混合系白血病易位基因10反式-2,4-癸二烯Mouse CYTIP (Cytohesin Ieracting Protein) 檢測試劑盒
CD99/E2 aigen CD99腺苷酸環(huán)化酶1聚(甲基乙烯基共聚馬來酸)Mouse CTLA4 (Cytotoxic T-Lymphocyte Associated Aigen 4) 檢測試劑盒
Thymosin Alpha-1 胸腺肽α1腺瘤樣息肉聚(甲基乙烯基共聚馬來酸)Mouse D2D (D-Dimer) 檢測試劑盒
T4 甲狀腺素T4溶血磷脂?;D(zhuǎn)移酶環(huán)丁基胺Mouse DAP6 (Death Associated Protein 6) 檢測試劑盒
Tie2 血管生成素受體2錨蛋白重復(fù)及SAM結(jié)構(gòu)域蛋白3環(huán)丁基胺Mouse DCN (Decorin) 檢測試劑盒
Phospho-Tie2 (Ser1119) 磷酸化血管生成素受體2磷酸化間變型淋巴瘤激酶環(huán)丁基胺Mouse DEFa5 (Defensin Alpha 5, Paneth Cell Specific) 檢測試劑盒
Phospho-Tie2 (Tyr992) 磷酸化血管生成素受體2?;o酶A脫氫酶很長鏈二異Mouse DHEA-S7 (Dehydroepiandrosterone S7) 檢測試劑盒
RARRES1/TIG1 視黃酸受體應(yīng)答蛋白1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)銜接結(jié)合蛋白二異Mouse DHEA-S (Dehydroepiandrosterone sulfate) 檢測試劑盒
β半乳糖苷酶Monkey CCL4L1 (Chemokine C-C-Motif Ligand 4 Like Protein 1) 檢測試劑盒
gamma氨基丁酸B型受體1Monkey DPP6 (Dipeptidyl Peptidase VI) 檢測試劑盒
G蛋白/鳥苷酸結(jié)合蛋白Monkey ANNA1(Ai-Neuronal Nuclear Aibody 1) 檢測試劑盒
GDNF家族受體α4 GDNFRα4Monkey MIA1 (Melanoma Inhibitory Activity Protein 1) 檢測試劑盒
神經(jīng)節(jié)肽Monkey NE/ELA2 (Elastase 2, Neutrophil) 檢測試劑盒
谷氧還蛋白/巰基轉(zhuǎn)移酶Monkey SOD1 (Superoxide Dismutase 1, Soluble) 檢測試劑盒
G蛋白偶聯(lián)受體GPR113蛋白Monkey PRSS12 (Protease, Serine 12) 檢測試劑盒
甘肽受體1Monkey OSF (Osteoclast Stimulating Factor 1) 檢測試劑盒
磷酸化APP(Tyr757)淀粉樣肽前體蛋白抗體Hyphomonasjohnsonii種屬: Hyphomonasjohnsonii分離基物: 淤泥安全等級: 1模式株: yes模式株培養(yǎng)基: 102生長條件: 26℃
Dactylella│sp.分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 18生長條件: 25-28℃-80℃冰箱凍結(jié)法;礦物油法;定期移植法
Streptomyces│sp.分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no抗細培養(yǎng)基: CM0027生長條件: 28C-80℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
Pseudomonas│mandelii分離基物: 土壤提供形式: 凍干物模式株: no培養(yǎng)基: 848生長條件: 20℃真空冷凍干燥法
Paenibacillus│kobensis分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no分類、研究,可以用來研發(fā)生產(chǎn)生物肥料。培養(yǎng)基: 0002生長條件: 28℃真空冷凍干燥法;礦物油法
Streptomyces│sp.分離基物: 沙漠土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no抗細、抗真和降血脂培養(yǎng)基: CM0027生長條件: 28C-80℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
Streptomyces│kitasatoensis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no產(chǎn)生Leucomycin 柱晶白霉素培養(yǎng)基: CM0039生長條件: 28C真空冷凍干燥
Influenzavirus A│Avian influenza virus分離基物: 病雞提供形式: 凍結(jié)物安全等級: 2模式株: no實驗研究其生物學(xué)活性,并進一步從基因水平上進行分析。培養(yǎng)基: 0生長條件: 37
Escherichia│coli提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 15生長條件: 37℃真空冷凍干燥法
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