免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
詳細(xì)介紹：

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抗體的制備過程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進(jìn)行保存。抗體一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià)，而真空干燥保存時(shí)間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)?？贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補(bǔ)體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)去激活補(bǔ)體系統(tǒng)、激發(fā)補(bǔ)體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動(dòng)免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對(duì)理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
TBX15 aibody55 kDaQ96SF7Human

TBX18 aibody65 kDaO95935Human, Mouse, Rat

TBX2 aibody74 kDaQ13207Human, Mouse, Rat

TBX2 aibody74kdQ13207Human, Mouse

TBX21,T-bet aibody60-62 kDaQ9UL17Human, Mouse

TBX22 aibody45 kDa and 55 kDaQ9Y458Human, Mouse, Rat

TBX3 aibody79 kDaO15119Human, Mouse, Rat

高分子量激肽原重鏈抗體別 名 Alpha 2 thiol proteinase inhibitor; HMW Kininogen light Chain; Alpha-2-thiol proteinase inhibitor; Fitzgerald factor; High molecular weight kininogen; HMWK; Ile-Ser-Bradykinin; Kallidin I; Kallidin II; Kininogen 1; KNG1; KNG1_HUMAN; Low molecular weight growth-promoting factor; Williams-Fitzgerald-Flaujeac factor.

驅(qū)動(dòng)蛋白KNS1抗體別 名 Conveional kinesin heavy chain; KIF5B; Kinesin 1 (110-120kD); Kinesin family member 5B; Kinesin heavy chain; Kinesin heavy chain ubiquitous; Kinesin-1 heavy chain; KINH; KINH_HUMAN; KNS 1; KNS; KNS1; Ubiquitous kinesin heavy chain; UKHC.

驅(qū)動(dòng)蛋白KIF5A抗體別 名 Kinesin 5A; Kinesin5A; Kinesin-5A; KIF 5A; KIF5A; KIF5A_HUMAN; Kinesin family member 5A; Kinesin heavy chain isoform 5A; Kinesin Heavy Chain Neuron Specific; Kinesin heavy chain neuron-specific 1; neuronal kinesin heavy chain 1; MY050; Neuronal kinesin heavy chain; NKHC 1; NKHC1; NKHC-1; NKHC; SPG 10.
堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗體Streptomyces│glauciniger分離基物: 土壤/近海紅樹林土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式株: no可用于抗活性及抗腫瘤活性研究培養(yǎng)基: 12生長(zhǎng)條件: 28℃液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Bacillus│sp.分離基物: 烏稍蠔提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式株: no用于堿性蛋白酶研究。培養(yǎng)基: CM0033生長(zhǎng)條件: 37℃真空冷凍干燥法

Paenisporosarcina│macmurdoensis提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式株: no培養(yǎng)基: 848生長(zhǎng)條件: 25℃真空冷凍干燥法

Sporobolomyces│jilinensis分離基物: Tilia amurensis提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式株: no培養(yǎng)基: 0013生長(zhǎng)條件: 17℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Escherichia│coli提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式株: no培養(yǎng)基: 33生長(zhǎng)條件: 37℃真空冷凍干燥法；定期移植法

Bacillus│subtilis分離基物: 臭豆腐提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式株: no用于產(chǎn)纖溶酶的研究培養(yǎng)基: CM0002生長(zhǎng)條件: 30℃真空冷凍干燥法

Haemophilus│parasuis分離基物: 腹腔積液提供形式: 凍結(jié)物安全等級(jí): 2模式株: no科研教學(xué)培養(yǎng)基: 0生長(zhǎng)條件: 37真空冷凍干燥法;

熒光假單胞種屬: Pseudomonas│fluorescens分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式株: no培養(yǎng)基: 0033生長(zhǎng)條件: 28℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

傷寒沙門氏種屬: Salmonella│typhi提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式株: no噬體分型用 Vi F3　　　9,12,Vi　d　-培養(yǎng)基: CM0051生長(zhǎng)條件: 37℃真空冷凍干燥法