免疫熒光技術(shù)的實驗步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強度。
詳細(xì)介紹：

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抗體的制備過程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進(jìn)行保存?？贵w一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價，而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)。抗體是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補體結(jié)合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
Phospho-5-Lipoxygenase (Ser663)  磷酸化5-脂氧合酶酸棗仁皂甙D2-氯TBX2/T-box2(T-box Protein 2)  新型抑癌基因(多肽)

8-OHdG  8-羥基脫氧鳥苷白樺脂酸甲磺酸雷沙吉蘭TCF7L2(transcription factor 7-like 2)  轉(zhuǎn)錄因子7類似物2抗原

A2AR  腺苷A2A受體升麻素苷甲磺酸雷沙吉蘭TDP-43/TARDBP (tar DNA binding protein)  Tar DNA 結(jié)合蛋白43抗原

AACT-Alpha1  α-1抗胰糜蛋白酶升麻素2-吡啶鹽酸鹽Tenascin  固生蛋白抗原

AAK1  AP2關(guān)聯(lián)激酶1類葉升麻苷(麥角甾苷)2-吡啶鹽酸鹽TEM 1/CD248(Tumor endothelial marker 1 precursor)  內(nèi)涎蛋白/內(nèi)皮唾液酸蛋白抗原

AARS2  氨酰tRNA合成酶2異類葉升麻苷(異麥角甾苷)異硫酰甲酸乙酯TFF3 (trefoil factor3)  三葉肽因子3(多肽)

AAT  α-1抗胰蛋白酶松果菊苷異硫酰甲酸乙酯TFPI-2 (tissue factor pathway inhibitor-2)  組織因子途徑抑制劑-2抗原

AATK  AATK細(xì)胞凋亡關(guān)聯(lián)酪氨酸激酶5-O-甲基維斯阿米苷4-(甲硫基)TIEG1/KLF10(TGF-beta inducible early response gene 1)  TGF-β誘導(dǎo)早期應(yīng)答基因1抗原

細(xì)胞角蛋白42Glutathionesulfonic acidPorcine FE (Ferritin) 檢測試劑盒

CD1054-溴巴豆酸乙酯Porcine snRNP/Sm (Small Nuclear Ribonucleoprotein) 檢測試劑盒

半胱胺酸蛋白酶蛋白-74-溴巴豆酸乙酯Porcine CNX (Calnexin) 檢測試劑盒

CD8/CD8-β4-溴巴豆酸乙酯Porcine ARRβ1 (Arrestin Beta 1) 檢測試劑盒

細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶CABLES2二氯烯胺Porcine GAL4 (Galectin 4) 檢測試劑盒

兔抗雞IgY二氯烯胺Porcine AVPR1A (Arginine Vasopressin Receptor 1A) 檢測試劑盒

20號染色體開放閱讀框1282-氯-6-氟基Porcine Bid (BH3 Ieracting Domain Death Agonist) 檢測試劑盒

細(xì)胞色素P450ⅡE12-氯-6-氟基Porcine C3c (Compleme Fragme 3c) 檢測試劑盒
著絲粒蛋白T抗體香菇Rat GAL3 (Galectin 3)  Kit

金龜子綠僵Rat GAL4 (Galectin 4)  Kit

硫化物氧化假諾卡氏Rat GAL7 (Galectin 7)  Kit

金黃色葡萄球Rat GAL8 (Galectin 8)  Kit

擬莖點霉Rat GAL9 (Galectin 9)  Kit

墨汁鬼傘Rat γGT1 (Gamma Glutamyltransferase 1)  Kit

高加索鏈霉Rat GJb1(Gap Junction Protein Beta 1)  Kit

微膠鐮孢Rat GIP (Gastric Inhibitory Polypeptide)  Kit