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免疫熒光技術的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 非受體性蛋白酪氨酸激酶ETK抗體 |
英文名稱 | BMX |
貨號 | BJ-K7426 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習性:
(1)結(jié)合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應抗原發(fā)生特異性結(jié)合,在體內(nèi)導致生理或病理效應;在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應??贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結(jié)合后,借助暴露的補體結(jié)合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結(jié)合不同種的細胞,產(chǎn)生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質(zhì),也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì),均能破壞抗體的作用。抗體可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
TC3 aibody66 kDaQ6NUS6Human, Mouse
TDG aibody55-60 kDaQ13569Human, Mouse, Rat
TDO2 aibody48 kDaP48775Human, Mouse, Rat
TDP1 aibody68 kDaQ9NUW8Human, Mouse, Rat
TDP-43 aibody43 kDaQ13148Human, Mouse, Rat, Zebrafish
TDP-43 aibody43 kDaQ13148Human, Mouse, Rat
TDP-43 aibody43 kDaQ13148Human, Mouse, Rat
G蛋白激活內(nèi)向鉀通道5抗體別 名 inwardly rectifying subfamily J member 5; Cardiac ATP sensitive potassium chann; Cardiac inward rectifier; CIR; G protein activated inward rectifier potassium chann 4; G protein-activated inward rectifier potassium chann 4; GIRK 4; GIRK-4; GIRK4; Heart KATP chann; Inward rectifier K(+) chann Kir3.4; Inward rectifier K+ chann KIR3.4; IRK-4; IRK5_HUMAN; KATP 1; KATP-1; KATP1; KCNJ 5; Kcnj5; KIR 3.4; KIR3.4; Potassium chann; Potassium chann inwardly rectifying subfamily J member 5; Potassium inwardly rectifying chann J5; Potassium inwardly rectifying chann subfamily J member 5.
心臟鉀離子通道蛋白亞基2抗體別 名 Cardiac potassium chann subunit; KCNG2; KCNG2_HUMAN; KV6.2; Potassium voltage-gated chann subfamily G member 2; Voltage-gated potassium chann subunit Kv6.2.
Ras信號轉(zhuǎn)導KSR1蛋白抗體別 名 BKSR 1; BKSR1; dKsr; EK 31; EK31; hb; Kinase suppressor of ras 1; Kinase suppressor of ras; KSR 1; KSR1; Positive Ras signaling mediator family member; RSU 2; RSU2; SR 31; SR31; Suppressor of activated let 60 Ras SUR3; Suppressor of Ras1 31.
非受體性蛋白酪氨酸激酶ETK抗體Pseudomonas│fluorescens分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no分類、研究,具有處理富營養(yǎng)水體和養(yǎng)殖廢水潛力。培養(yǎng)基: 0002生長條件: 28℃真空冷凍干燥法;礦物油法
Pseudochrobactrum│asaccharolyticum分離基物: 沉積物/表層沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no潛在的有機污染物降解/分離自十溴聯(lián)醚富集群培養(yǎng)基: 471生長條件: 28℃液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Flavobacterium│degerlachei分離基物: 沉積物/深灰色沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no產(chǎn)酶微生物/產(chǎn)蛋白酶株培養(yǎng)基: 821生長條件: 15℃液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Escherichia│coli分離基物: 死亡雞提供形式: 凍干物安全等級: 2模式株: no用于科研培養(yǎng)基: 335生長條件: 37真空冷凍干燥法;
Avibirnavirus│Infectious bursal disease virus分離基物: 病雞提供形式: 凍結(jié)物安全等級: 2模式株: no用于科研培養(yǎng)基: 0生長條件: 37其他;
Escherichia coli DH5α( pUC19)提供形式: 西林瓶,片安全等級: 1模式株: nopUC19質(zhì)粒提取。培養(yǎng)基: LB培養(yǎng)基,含50μg/mL氨芐青霉素鈉。
酵母提取物 5.0 g,蛋白胨 10.0 g,NaCl 10.0 g,瓊脂 15.0 g,蒸餾水 1.0 L,pH 7.0。121℃,15min滅。 滅結(jié)束,冷卻降溫后加入氨芐青霉素鈉,使培養(yǎng)基中氨芐青霉素鈉終含量為50μg/mL。生長條件: 37℃ ,好氧-20℃避光保存;運輸條件:常溫運輸。
嗜熱鏈球種屬: Streptococcus│thermophilus提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no巴氏滅典型株。培養(yǎng)基: CM0503生長條件: 37℃真空冷凍干燥法
Bacillus│safensis分離基物: 生物樣/野生鯔魚腸道內(nèi)容物提供形式: 凍干物模式株: no共生微生物/野生鯔魚腸道共生 產(chǎn)酶微生物/脂酶(三丁酸甘油酯)、蛋白酶、纖維素酶培養(yǎng)基: 33生長條件: 28℃液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Boletus│edulis Bull.:Fr.分離基物: 子實體提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no食用培養(yǎng)基: 150生長條件: 28-30定期移植法
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