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免疫熒光技術(shù)的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 第七號染色體開放閱讀框12抗體 |
英文名稱 | C7orf12 |
貨號 | BJ-K7804 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習性:
(1)結(jié)合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合,在體內(nèi)導致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)??贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補體:抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后,借助暴露的補體結(jié)合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結(jié)合不同種的細胞,產(chǎn)生不同的疚,參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質(zhì),也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì),均能破壞抗體的作用。抗體可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
CUL1 antibody90 kDa Q13616Human資源名稱球毛殼菌分離基物:濾紙?zhí)峁┬问?斜面培養(yǎng)物安全等級:1
CUL2 antibody87 kDa Q13617Human資源名稱葡萄座腔菌分離基物:干部提供形式:斜面培養(yǎng)物模式菌株:no
CUL3 antibody85 kDaQ13618Human, Mouse, Rat資源名稱葉點霉屬分離基物:葉片提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1
CUL4A antibodyQ13619Human農(nóng)業(yè)微生物菌種農(nóng)業(yè)微生物菌種農(nóng)業(yè)微生物菌種
CUL4A antibody88 kDa, 77 kDa Q13619Human, Monkey, Mouse, Rat資源名稱異型酒香酵母提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no
CUL4A-Specific antibody77 kDa Q13619Human, Mouse, Rat資源名稱忍冬木層孔菌提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no
CUL4B antibody115 kDaQ13620Human, Mouse, Rat資源名稱香菇提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no
燦爛類芽胞桿菌號:579-13-5英文名字:OligomycinA分子式:C45H74O11分子量:791.06物理性狀及指標:
茯苓(斜面)號:183789-7英文名字:MithramycinA分子式:C52分子量:1085.16H76O24物理性狀及指標外觀:黃色結(jié)晶
植物乳桿菌(胚芽乳桿菌)號:1911148英文名字:ithromycin分子式:C43H65N5O10分子量:812.00物理性狀及指標:
B組鏈球菌號:416219-2英文名字:CiclopiroxOlamine分子式:C12H17NO2.C2H7NO分子量:268.35物理性狀及指標:
腸道致病性大腸埃希氏菌號:85721-33-1英文名字:Ciprofloxacin分子式:C17H18FN3O3分子量:331.34物理性狀及指標:
第七號染色體開放閱讀框12抗體芽孢桿菌屬Human MFG-E8 (Milk Fat Globule EGF Factor 8) Kit猴孤雌單倍體胚胎干細胞
芽胞桿菌Human SERT (Serotonin Transporter ) Kit 非洲爪蟾腎細胞
Human BMG/β2-MG (Beta-2-Microglobulin) Kit中華鱉心肌來源細胞
蘇云金芽孢桿菌鲇澤亞種Human TPP (Thrombus Precursor Protein) Kit中華鱉肺成纖維細胞
焦曲霉Human TXB2 (Thromboxane B2) Kit中華鱉脾臟成纖維細胞
玫瑰皮黃鏈霉菌Human STC2 (Stanniocalcin 2) Kit迪慶綿羊皮膚成纖維細胞
樟疫霉Human FG (Fibrinogen) Kit綿羊肺成纖維細胞
貝萊斯芽胞桿菌Human FDP (Fibrinogen Degradation Product) Kit金黃地鼠皮膚成纖維細胞
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