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免疫熒光技術(shù)的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 鈣激活鉀通道蛋白α1抗體 |
英文名稱 | BK channel |
貨號 | BJ-K7546 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習性:
(1)結(jié)合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合,在體內(nèi)導致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)??贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補體:抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后,借助暴露的補體結(jié)合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結(jié)合不同種的細胞,產(chǎn)生不同的疚,參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質(zhì),也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì),均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
BMP9 antibody30 kDa, 46 kDa Q9UK05Human, Mouse, Rat資源名稱短小芽孢桿菌提供形式:凍干管,斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no
BMPR1A antibody60 kDa P36894Human, Mouse, Rat資源名稱費氏志賀氏菌提供形式:凍干粉安全等級:1模式菌株:no
BMPR2 antibody120kd,97kdQ13873Human, Mouse, Rat資源名稱大豆根瘤菌提供形式:凍干粉安全等級:1模式菌株:no
BMPR2 antibody120kd,97kdQ13873Human, Mouse, Rat資源名稱冰核細菌安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法
BMSC UbP antibody41 kDa Q96S82Human, Mouse, Rat資源名稱陰溝腸桿菌提供形式:凍干粉安全等級:1模式菌株:no
B-Myb antibody90 kDa P10244Human, Mouse, Rat資源名稱產(chǎn)氣腸桿菌分離基物:痰液提供形式:凍干粉安全等級:1
BNC2 antibody122-140 kDa Q6ZN30Human, Mouse 資源名稱熒光假單胞菌提供形式:凍干粉安全等級:1模式菌株:no
傳染性造血器官壞死病病毒PCR檢測試劑盒 Infectious Hematopoietic Necrosis Virus(IHNV)RTPCR規(guī)格:250g用途:用于多粘菌素等的效價測定
傳染性皮下和造血器官壞死病病毒PCR檢測試劑盒 Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus(IHHNV)RTPCR規(guī)格:250g用途:用于厭氧菌培養(yǎng)、增菌、菌種保存使用
同禽皰疹病毒1型雞傳染性喉氣管炎病毒PCR檢測試劑盒 Infectious Laryngotracheitis Virus(ILTV,1)PCR規(guī)格:10g用途:微生物指示劑
傳染性肌肉壞死病病毒PCR檢測試劑盒 Infectious Myonecrosis Virus(IMNV)RTPCR規(guī)格:250g用途:用于細菌的增菌培養(yǎng)或純化培養(yǎng)(GB標準)
傳染性胰臟壞死病病毒PCR檢測試劑盒 Infectious Pancreatic Necrosis Virus(IPNV)RTPCR規(guī)格:250g用途:用于乳菌的分離培養(yǎng)
鈣激活鉀通道蛋白α1抗體費氏中華根瘤菌Human CA1 (Carbonic Anhydrase I) Kit 小鼠胚胎干細胞;ES-D3(CRL-1934)
枝狀枝孢Human CA2 (Carbonic Anhydrase II) Kit 小鼠胚胎成纖維細胞;C3H/10T1/2, Clone 8
稻平臍蠕孢Human HbCO (Carboxyhemoglobin) Kit小鼠胰島內(nèi)皮細胞;MS1
青銅色小單孢菌Human CEA (Carcinoembryonic Antigen) Kit小鼠腎小球系膜細胞;SV40 MES 13
賴氨酸芽胞桿菌屬Human ANKRD1 (Ankyrin Repeat Domain 1) Kit小鼠胚胎肝細胞;BNL CL.2
巴氏醋桿菌巴氏亞種Human c/TNNT2 (Troponin T Type 2, Cardiac) Kit小鼠胚胎成纖維細胞;Psi2 DAP
釀酒酵母Human CMLC-1 (Cardiac Myosin Light Chains 1) Kit小鼠皮下結(jié)締組織細胞;L Wnt-3A
硫色小針層孔菌Human IL-7 (Interleukin 7) Kit小鼠成纖維細胞;NCTC clone 929 [L cl, L-929, derivative of Strain L]
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