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免疫熒光技術(shù)的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 真核翻譯起始因子2C3抗體 |
英文名稱 | Argonaute 3 |
貨號 | BJ-K7030 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性:
(1)結(jié)合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合,在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)??贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補體:抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后,借助暴露的補體結(jié)合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結(jié)合不同種的細胞,產(chǎn)生不同的疚,參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質(zhì),也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì),均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
蛋白酪氨酸酸酶受體K(PTPRK)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- CIC antibody34 kDa
蛋白酪氨酸酸酶受體B(PTPRB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- CIDEA antibody25kd
三葉因子1(TFF1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- CILP2 antibody90 kDa
雌激素受體α(ERα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- CIN85 antibody85 kDa
膽囊收縮素B受體(CCKBR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- Cingulin antibody136-150 kDa
催產(chǎn)素(OT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- CIP29 antibody29-32 kDa
凋亡蛋白酶激活因子1(APAF1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- CIRBP antibody18 kDa
V-Myb髓細胞組織增生病毒癌基因同源物(MYB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- Cirhin antibody70-77 kDa
70kDa熱休克蛋白4(HSPA4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- CISD1 antibody17 kDa
泛素連接酶E3A(UBE3A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- CISD2 antibody13-15 kDa
多聚免疫球蛋白受體(PIGR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- CISD2-Specific antibody15 kDa
促胰液素(SCT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- CIT antibody230kd
促胰液素受體(SCTR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- CITED2 antibody24 kDa
ⅡD組脂酶A2(PLA2G2D)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- Citrate synthase antibody50 kDa
S100鈣結(jié)合蛋白A13(S100A13)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- CKAP2 antibody75-85 kDa
通用轉(zhuǎn)錄因子ⅡH肽1(GTF2H1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- CKAP2L antibody84 kDa
S100鈣結(jié)合蛋白A12(S100A12)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- CKAP4 antibody63 kDa
70kDa熱休克蛋白1A(HSPA1A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- c-Kit/CD117 antibody140 kDa
70kDa熱休克蛋白9(HSPA9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- c-Kit/CD117 antibody120 kDa, 145 kDa
真核翻譯起始因子2C3抗體節(jié)桿菌Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..蠟樣芽胞桿菌
酮叢毛單胞菌freeze-dried破傷風(fēng)梭菌
香氣紅冬孢鎖擲孢酵母Streptococcus equinus Andrewes and Horder口蹄疫病毒(A型)
檸檬原小單孢菌Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..口蹄疫病毒(A2亞型)
牛肝菌Cercospora oryzae Miyake, anamorph口蹄疫病毒(A3亞型)
大腸埃希氏桿菌Serratia marcescens Bizio綿羊痘病毒
釀酒酵母frozen偽狂犬病病毒
布氏白僵菌(卵孢白僵菌)Homo sapiens, human肉毒梭菌 毒素C型
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