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免疫熒光技術的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 磷酸化相關死亡促進因子抗體 |
英文名稱 | Phospho-Bad (Ser118) |
貨號 | BJ-K7322 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習性:
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應抗原發(fā)生特異性結合,在體內(nèi)導致生理或病理效應;在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應??贵w是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結合不同種的細胞,產(chǎn)生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質(zhì),也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì),均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
SORBS1 aibody70-75 kDaQ9BX66Human, Mouse
SORBS2 aibodyO94875Human, Mouse
SORCS1 aibody60-80 kDaQ8WY21Human, Mouse
SORCS1 aibody60-80 kDaQ8WY21Human, Mouse
SORCS2 aibody128-140 kDaQ96PQ0Human, Mouse, Rat
SORLA aibodyQ92673Human, Mouse, Rat
Sortilin aibody100-110 kDaQ99523Human, Mouse, Rat
N,N-Diethylformamide N,N-二基酰胺 6174-5 分子式:C5H11NO 分子量:101.15
Dimethyl trisulfide 二基三硫 36580 分子式:C2H6S3 分子量:126.26
Indole 吲哚 120-72 分子式:C8H7N 分子量:117.15
1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-propanol 六氟異醇(HFP) 9206-1 分子式:C3H2F6O 分子量:168.04
磷酸化相關死亡促進因子抗體Leinula│edodes提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25℃液氮超低溫凍結法;礦物油法;定期移植法
Streptomyces│sp.分離基物: 表面土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no分類學及微生物藥物學的研究培養(yǎng)基: 12生長條件: 28℃真空冷凍干燥法;其他
Fusarium│solani提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25℃
百日咳博德特氏種屬: Bordela│pertussis提供形式: 凍干物安全等級: 2模式株: no生產(chǎn)苗 1,2,3 微生物學報 5(4)411 1957培養(yǎng)基: CM0119生長條件: 37℃真空冷凍干燥法
Streptomyces│sp.分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no結核桿DNA回旋酶抑制劑培養(yǎng)基: CM0027生長條件: 28C真空冷凍干燥
Penicillium│sp.提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no產(chǎn)生青霉素培養(yǎng)基: CM0018生長條件: 28C真空冷凍干燥
Salmonella│gallinarum分離基物: 肉雞盲腸提供形式: 凍干物模式株: no抗藥性檢驗培養(yǎng)基: 335生長條件: 37真空冷凍干燥法;
Geobacillus│sp.分離基物: 砂土提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 859生長條件: 70℃-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Rhizobium│sp.分離基物: 華楹根瘤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no固氮培養(yǎng)基: 63生長條件: 28-30定期移植法
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