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免疫熒光技術的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 脂肪酰輔酶A家族成員1抗體 |
英文名稱 | Acetoacetyl-CoA synthetase |
貨號 | BJ-K6383 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習性:
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應抗原發(fā)生特異性結合,在體內(nèi)導致生理或病理效應;在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應??贵w是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結合不同種的細胞,產(chǎn)生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質,也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質凝固變性的物質,均能破壞抗體的作用。抗體可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
血小板衍生生長因子受體α多克隆抗體100 ul PDGFR α Polyclonal Antibody
血小板衍生生長因子C多克隆抗體1 Kit PDGF-C Polyclonal Antibody
血小板糖蛋白VI多克隆抗體100 ul GPVI Polyclonal Antibody
血小板糖蛋白9多克隆抗體400 ul GPIX Polyclonal Antibody
血小板親和蛋白3多克隆抗體1 Kit PKP3 Polyclonal Antibody
血小板內(nèi)皮聚集受體1多克隆抗體1 Kit PEAR1 Polyclonal Antibody
血小板反應蛋白4多克隆抗體100 ul Thrombospondin 4 Polyclonal Antibody
血小板反應蛋白3多克隆抗體100 ul TSP3 Polyclonal Antibody
血清和糖皮質激素誘導的蛋白激酶1小鼠單克隆抗體(4D12)50 ml SGK1 Mouse Monoclonal Antibody(4D12)
血清淀粉狀蛋白A1多克隆抗體100 ug SAA1 Polyclonal Antibody
血清/糖皮質激素調控激酶3多克隆抗體10 ml SGK3 Polyclonal Antibody
血清/糖皮質激素調控激酶2多克隆抗體50 ml SGK2 Polyclonal Antibody
血漿銅藍蛋白多克隆抗體300 ul CERU Polyclonal Antibody
血紅素氧合酶2多克隆抗體5 mg HMOX2 Polyclonal Antibody
血紅蛋白μ多克隆抗體100 ul HBM Polyclonal Antibody
脂肪酰輔酶A家族成員1抗體巨大芽胞桿菌Salmonla enterica subsp.enterica (e ..樹干畢赤酵母
杏鮑菇Staphylococcus epidermidis (Winslow and Win ..裂褶菌(斜面)
鮮綠青霉frozen非脫羧勒克菌
芽孢桿菌frozen燕麥食酸菌燕麥亞種
血紅紅曲菌dried李氏放線桿菌
乳桿菌屬Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..福賽坦氏菌
蘇云金芽孢桿菌肯尼亞亞種Verticillium fungicola (Preuss) Hassebrauk, ..豬丹毒絲菌
水稻漢納酵母Marchandiomyces corallinus (Roberge) Dieder ..人心桿菌
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