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免疫熒光技術的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產品名稱 | 載脂蛋白H抗體 |
英文名稱 | APOH |
貨號 | BJ-K6664 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產品僅用于科研保存前需經除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習性:
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應抗原發(fā)生特異性結合,在體內導致生理或病理效應;在體外產生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應??贵w是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結合不同種的細胞,產生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質,也具有刺激機體產生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質凝固變性的物質,均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經透析法將其純化。
Phospho-RSK2 (Ser227) 磷酸化核糖體S6激酶RSK2丹參酚酸B甲酯2-氟-6-(三氟甲基)溴芐Mouse F-E3 (Free estradiol)檢測試劑盒
Phospho-RSK2 (Tyr529) 磷酸化核糖體S6激酶RSK2桑辛素2-氟-6-(三氟甲基)溴芐Mouse PRL (Prolactin) 檢測試劑盒
RSK3/Ribosomal S6 kinase 3 核糖體蛋白S6激酶家族RSK3桑皮苷A乙二胺四二酐Mouse MYO (Myoglobin) 檢測試劑盒
Phospho-RSK3 (Thr353/356) 磷酸化核糖體蛋白S6激酶家族RSK3桑皮苷C乙二胺四二酐Mouse -T (Troponin T)檢測試劑盒
Phospho-RSK3 (Thr356/Ser360) 磷酸化核糖體蛋白S6激酶家族RSK3基酞二亞乙基三胺五二酐(DTPA)Mouse -I (Troponin I) 檢測試劑盒
RSV 呼吸道合胞病單克隆甲基蓮心堿1,2-雙(二甲基瞵)乙烷Mouse PAPPA (Pregnancy Associated Plasma Protein A)檢測試劑盒
RXR Alpha/RXRA 核受體RXRα新穿心蓮內酯1,2-雙(二甲基瞵)乙烷Mouse ALP (Alkaline Phosphatase) 檢測試劑盒
RXR gamma 維甲酸受體G氧化芍藥苷2,4-二羥基嘧啶-5-羧酸Mouse NSE (Neuron-Specific Enolase) 檢測試劑盒
GADD45γ相互作用蛋白1Monkey CDK4 (Cyclin Depende Kinase 4) 檢測試劑盒
GTP結合蛋白4(慢性腎功能衰竭蛋白)Monkey CKMT1B (Creatine Kinase, Mitochondrial 1B ) 檢測試劑盒
磷酸化gamma氨基丁酸B型受體1Monkey PDIA5 (Protein Disulfide Isomerase A5) 檢測試劑盒
磷酸化谷氨酸受體2Monkey TPO (Thyroid Peroxidase) 檢測試劑盒
磷酸化鳥苷酸調節(jié)蛋白12Monkey PSG1/SP1 (Pregnancy Specific Beta-1-Glycoprotein 1) 檢測試劑盒
珠蛋白轉錄因子1Monkey MBP/MBL (Mannose Binding Protein/Mannose Binding Lectin) 檢測試劑盒
谷胱甘肽過氧化酶3Monkey Ai-CIIAb (Ai-Type II Collagen Aibody) 檢測試劑盒
谷胱甘肽過氧化酶4Monkey SDC1 (Syndecan 1) 檢測試劑盒
載脂蛋白H抗體Bacillus│thuringiensis提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 2生長條件: 30℃真空冷凍干燥法
Actinoplanes│missourieneis分離基物: 土壤表層5-10cm處提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0012生長條件: 28-30℃-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Bacillus│jeotgali分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 832生長條件: 30℃真空冷凍干燥法
Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no以糖蜜為原料發(fā)酵生產酒精。培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28-30℃真空冷凍干燥法
Pichia anomala提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no醬油增香培養(yǎng)基: YM 培養(yǎng)基:酵母提取物,3.0 g 麥芽提取物,3.0 g 葡萄糖,10.0 g 蛋白棟,5.0 g 瓊脂,20.0 g 蒸餾水1000 ml ,pH 6.2 +/- 0.2生長條件: 28℃,好氧真空冷凍干燥法
Pleurotus│ostreatus (Jacq.) P. Kumm.提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 25定期移植法
Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no釀造啤酒。培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28-30℃真空冷凍干燥法
問號狀鉤端螺旋體種屬: Leptospira│ierrogans提供形式: 凍結物安全等級: 2模式株: no血清學分型 Pyrojenes robinsoni培養(yǎng)基: CM0114生長條件: 37℃-80℃冰箱凍結法
Chaetomium│globosum提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 25℃-80℃冰箱凍結法;礦物油法;定期移植法
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