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免疫熒光技術(shù)的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 卵黃狀黃斑病蛋白3抗體 |
英文名稱 | Bestrophin 3 |
貨號 | BJ-K7441 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性:
(1)結(jié)合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合,在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)??贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補體:抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后,借助暴露的補體結(jié)合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結(jié)合不同種的細胞,產(chǎn)生不同的疚,參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質(zhì),也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì),均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
ARID4B antibody100 kDa ; 200 kDa Q4LE39Human資源名稱瘡皰丙酸桿菌分離基物:污染發(fā)酵液提供形式:凍干物安全等級:1
ARIH2 antibody59 kDa O95376Human, Mouse, Rat資源名稱解凝乳類芽胞桿菌分離基物:土壤提供形式:凍干物安全等級:1
ARK5 antibody74 kDa O60285Human, Mouse 資源名稱動物雙歧桿菌提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no
ARL1 antibody20 kDa P40616Human, Mouse, Rat資源名稱膠凍樣類芽孢桿菌提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no
ARL13B antibody40-48 kDa, 66 kDa Q3SXY8Human, Mouse, Rat, Dog資源名稱乳酒假絲酵母分離基物:酸馬奶,pH4.21提供形式:凍干物安全等級:1
ARL15 antibody23kdQ9NXU5Human, Mouse, Rat資源名稱擴展青霉提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no
ARL2 antibody21-25 kDa P36404Human, Mouse, Rat資源名稱雜色曲霉原變種提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no
陰溝腸桿菌PCR檢測試劑盒 Enterobacter cloacaePCR規(guī)格:20支詳情介紹
阪崎腸桿菌PCR檢測試劑盒 Enterobacter sakazakiPCR規(guī)格:250g用途:用于志賀氏菌的葡萄糖銨試驗(GB標準)
腸桿菌屬通用PCR檢測試劑盒 Enterobacter spp.PCR規(guī)格:10個/包用途:用于軍團菌的選擇性分離培養(yǎng)
鉛黃腸球菌PCR檢測試劑盒 Enterococcus cassiflavusPCR規(guī)格:1ml*20用途:用于生化鑒定
耐久腸球菌PCR檢測試劑盒 Enterococcus duransPCR規(guī)格:BR250g詳情介紹
卵黃狀黃斑病蛋白3抗體盤多毛孢Human ApoA1 (Apolipoprotein A1) Kit人前列腺癌細胞;LNCaP clone FGC
松口蘑Human LN (Laminin) Kit人結(jié)腸腺癌細胞;SW1116
干環(huán)褶孔菌Human COL1 (Collagen Type I) Kit人子;C-33 A
稻離蠕孢Human MMP-25 (Matrix Metalloproteinase 25) Kit人子宮頸表皮癌細胞;ME-180
釀酒酵母Human MMP-10 (Matrix Metalloproteinase 10) Kit人子宮頸表皮癌細胞;MS751
昆明鏈霉菌Human MMP-12 (Matrix Metalloproteinase 12) Kit人肝膽管癌細胞;RBE
香菇(林研1號)Human MMP-13 (Matrix Metalloproteinase 13) Kit人肝母細胞瘤細胞;HuH-6
中間普氏菌Human sICAM-1/CD54 (Soluble Interclular Adhesion Molecule 1) Kit 人肝癌細胞;Li-7
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